结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的表达、纯化及免疫学特性的初步研究

发布时间：2020-12-31 09:40

　　结核病（tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）所致的以呼吸系统感染为主的慢性传染病。目前全球有1／3的人口感染过MTB，每年有800万新感染患者和300万患者死亡，表明TB仍是影响全球人类健康的一个主要公共卫生问题。近年来，由于预防疫苗卡介苗（Bacillus Calmette Guerin，BCG）保护性不完善、耐药MTB流行、与人类免疫缺陷病毒（Human immunodificiciency Virus，HIV）的合并感染以及人口流动等原因使TB疫情日益严重。同时，由于BCG的广泛接种，使纯化的结核菌素蛋白衍生物（purified protein derivative of tuberculin，PPD）诊断试剂特异性不高，TB病例的及时发现成为难题。鉴于以上问题，TB新型疫苗或增强BCG免疫效果以及特异、快速诊断试剂的研究具有重要意义。 动物实验表明，MTB培养滤液蛋白（culture filtrate proteins，CFP）如MPT64、ESAT-6、Ag85复合体、MPT32等可诱导产生保护... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳Fig3AgarosegeleleetrePhoresisofPCRProduet，v.

.eoliDI王sa感受态细胞。随机挑选2个菌落提取质粒，经Ban，Hl不11Hindlll双酶切后，切出698bp大小的片段，为阳性克隆(图4)。将阳性克隆命名为pGEM一MPT64。\\一李/Z(〕()()l、pl()(川bp75()l、P5()()l)P25〔)Ilpl()()11P图4重组质粒的酶切分析Fig4RestrietionenzymeanalysisofthereeombinantPlasmidM:DNAMarkerDLZ，000;l、2:eutwithBan，HlandHl’ndIII

理的pProEXHTb载体片段连接转化E.eoliDHS。感受态细胞，随机挑选4个克隆进行酶切鉴定，用BamHI和Hindm双酶切后，均可切出698bP的片段(图6)，证明克隆成功。阳性克隆命名为pProExHTb一MPT64。234\\一///2()‘)()hl)l()()砚)t、万)75()I一百)5(川hl)2污()hl-l()()hl)图6重组pProExHTb一MPT64质粒的酶切分析Fig6RestrietionenzymeanalysisofthereeombinantPlasmidPProEXHTb一MPT64M:DNAMarkerDLZ，000;l一4:eutwithBamHI和Hindlll

【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌培养物不同组份蛋白质组研究[J]. 庄玉辉,何秀云,张小刚,李国利,阙海萍,刘绍军.  微生物学报. 2002(03)
[2]第四次全国结核病流行病学抽样调查——结核分支杆菌耐药性分析与评价[J]. 刘宇红,姜广路,赵立平,付育红,李云絮,毕志强,王甦民.  中华结核和呼吸杂志. 2002(04)
[3]抗结核药物的研究进展[J]. 何国钧,肖和平.  中华结核和呼吸杂志. 2000(10)
[4]改良消减杂交法筛选结核分枝杆菌毒力相关基因[J]. 李元,李别虎,白光春,范雄林,薛莹,贾向志,庄玉辉.  第四军医大学学报. 2000(07)

博士论文
[1]结核分枝杆菌基因疫苗的构建及其免疫学特性的初步研究[D]. 范雄林.第四军医大学 2001

硕士论文
[1]结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B基因的克隆、表达、纯化及免疫学特性的初步研究[D]. 薛莹.第四军医大学 2002



本文编号：2949393