抗人IgGγ链单克隆抗体的研究及其在VEGF人源化单克隆抗体检测中的应用

发布时间：2021-01-05 09:46

　　目的:制备人IgGγ链（重链）单克隆抗体及其杂交瘤细胞,并对其研究和鉴定。将其应用于人源抗体的扩大培养,分离纯化以及生物制品质量控制中,建立起一种方便,快速,特异性强,重复性好的定量检测方法。 方法:分离纯化人血清中的IgG以最佳免疫途径免疫雌性Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在融合剂聚乙二醇（PEG,MW4000）作用下融合,筛选并建立人IgGγ链单克隆抗体（McAb 612）杂交瘤细胞株（MKIG12）。以人IgGγ链（重链）单克隆抗体包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记人IgGγ链（重链）单克隆抗体为已知抗体兼显色抗体,建立了检测人源抗体的双抗夹心ELISA法。 结果:经SDS-PAGE证实纯化人IgG由轻链26.44 KD（1链24KD,κ型和λ型）和重链52.73 KD（h链即γ链,50～55KD）两亚单位组成。杂交瘤MKIG12经鉴定,具有以下特征:①杂交瘤MKIG12连续传代120d,抗体分泌稳定:②染色体数目较多（100条）, 

【文章来源】：四川大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人I姊标准曲线

图2人I邪蛋白AsPeharose亲和层析图谱Fig2ProteinAsePharoseaffinityehro.atogrP8hyofhmunal邪4.2人I邪的SDS一APGE分析将标准蛋白，人gIG的盐析液，人gIG离子交换纯化物，人IgG亲和层析纯化物同时进行SDS一PAGE分析，如图3，alnel为

4.2人I邪的SDS一APGE分析将标准蛋白，人gIG的盐析液，人gIG离子交换纯化物，人IgG亲和层析纯化物同时进行SDS一PAGE分析，如图3，alnel为图3人I够的SDS一AGE分析图谱Fig3SDS一PAGEnaalyzingprofileofhu.anIGglanel:ProteinWMmarker1ozne止:(NH4):S氏prieiPitationlane3:Iron一Exehangeehromatographyl、一ne!:一f，f1nityehromatography

【参考文献】：
期刊论文
[1]流动注射免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白A[J]. 汪敬武,王兆喜,杨伟平.  分析化学. 2004(06)
[2]应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量[J]. 赵红,桥爪秀一,王棣,李晓进,龟井优德,林卫,王亚男,马瑞.  微生物学免疫学进展. 2003(04)
[3]以pH敏感相分离高分子为载体的酶联荧光免疫分析法测定人IgG[J]. 林鹏,郑洪,杨黄浩,杨薇,张长弓,许金钩.  高等学校化学学报. 2003(07)
[4]抗体药物研究进展[J]. 沈倍奋.  第二军医大学学报. 2002(10)
[5]固体基质室温磷光免疫分析法测定人IgG[J]. 刘佳铭,付艳,余冰宾,李隆弟.  高等学校化学学报. 2001(10)
[6]肾病综合征患者血清中C3、C4、IgG、IgA、IgM的分析[J]. 周韵九,张文玲,王雷.  中国现代医学杂志. 2001(10)
[7]血清异常IgA测定诊断IgA肾病的新方法[J]. 燕秋,张文利,朱正美,林宏丽,尹永红,马悦.  中华检验医学杂志. 2001(05)
[8]抗人免疫球蛋白IgG单克隆抗体制备及其特性鉴定[J]. 王香菊,徐秀兰,严红,蒯应松,陈艳.  中国法医学杂志. 1999(02)
[9]用改良型5L细胞反应器连续培养杂交瘤细胞[J]. 陆苹,王欣,胡志贤,王国丰,孙涛.  上海免疫学杂志. 1999(03)
[10]高效亲和膜色谱快速分析及小量制备蛋白质[J]. 周冬梅,邹汉法,倪坚毅,杨利,贾凌云,张玉奎.  生物工程学报. 1998(04)



本文编号：2958448