人类锌指蛋白家族新基因ZNF394的克

发布时间：2021-01-07 23:33

　　在脊椎动物的发育调控当中，锌指蛋白基因起着广泛的作用。确定对心血管系统中起作用的调控基因对于我们了解先天性心脏病和其它心血管疾病的发病机理非常必要。而锌指蛋白中的Cys2／His2型锌指蛋白基因是一类很大的转录调控因子家族基因，已发现很多Cys2／His2型锌指蛋白参与了心脏的发育和心血管疾病。为了了解对心脏发育和疾病有关的新基因，我们通过扩增人类心脏文库发现了一个SCAN（LER）框的锌指蛋白新基因，通过国际基因命名委员会命名为ZNF394。ZNF394全长2180个碱基，含有一个长为1686个碱基的开放阅读框，编码为561个氨基酸的蛋白质，蛋白质分子量大约为64千道尔顿，位于染色体7q11． 21。该基因在N端含有一个高度保守的SCAN型结构域，相邻一个KRAB框型结构域，并且在其c端具有非常保守空间的7个连续的C2H2型锌指结构单元，通过对人类成体组织进行Northern杂交，得到一个大约为2． 18KB的转录本，该转录本存在于心脏、肌肉组织和脑组织，表明锌指蛋白基因ZNF394在人类成体组织中的心脏、脑和肌肉组织中有较特异的表达。通过人工合成多肽，免疫新西兰大白兔，获得多克隆抗... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

为SCAN(LER)结构域家族的几个成员的核昔酸序列比较

为通过比较发现在新基因多叨巧渗李中的1368bp中有一个Hz’n班H酶切位点。所以通过H，’n班H限制性内切酶进行酶切不仅可以检测出连接正反的方向，也可以进一步判断所扩增的PCR产物是否正确，如图5一1例举了表达载体pEGFP一Nl的酶切结果。123X4—300ObP—2000bp—1500bP—1200bn—1031bP—600bP—500bP图5一1l为EGFP的空载体的琼脂糖凝胶点样结果，2，3为方叮刀故H酶切结果，M为DNAMarker，4为重组质粒pEGFP一NI一ZNF394的酶切结果5.2.2汤Vl召9岁基因在亚细胞结构中的定位分析

对人胚胎的28天和35天胚胎进行染色，发现刀叭笼丫所产生的抗体在人类胚胎的心脏组织有表达。该结果进一步说明了多协召夕璧在心脏的发育调控当中具有重要的作用。结果见图5一4。圈5一4图5一4为胚胎原位抗体染色，箭头表示zNF394蛋白质在心脏组织和上下肢肌肉组织中有表达。A图为28天的人胚胎，原始胚胎体长为0.scm，B图为35天的人胚胎，原始胚胎体长为1.OC.。通过比较，发现在28天的胚胎中的心脏、肢芽(用箭头符号表示)和肝脏有表达(用三角符号表示)，而在35天的胚胎中的心脏、肢芽(用箭头符号表示)和脊索中出现了表达(用三角符号表示)。5.3讨论将外源基因转入细胞是目前研究基因编码产物功能和基因表达调控的基本方法。荧光素酶、p一半乳糖昔酶和绿色荧光蛋白通常作为报告基因，通过分析报告基因的表达量可以定量分析外源基因的表达情况。质粒是基因工程重要的载体之一。它是细胞内的共生型遗传因子

【参考文献】：
期刊论文
[1]锌指结构:最普遍的核酸识别元件[J]. 赵志虎,马清钧.  生物技术通讯. 2001(01)



本文编号：2963456