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人源抗HIV-1gp120趋化蛋白受体结合位点单克隆Fab抗体基因的获得

发布时间:2021-01-14 14:45
  我们分别根据人免疫球蛋白重链Fd段和κ链的 5’、3’端基因序列合成了二对引物,以抗人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)抗体阳性患者外周血淋巴细胞中提取的mRNA为模板,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出了Fd段和κ链基因片段,插入载体pComb3,以电击法转化大肠杆菌TG1,建立了库容量为1013CFU/ml的人源噬菌体Fab抗体库。同时根据HIV-1 gp120 趋化蛋白受体结合位点的氨基酸序列合成了含有Arg-419、Ile-420、Lys-421、Gln-422、Pro-438的23肽,并以此23肽为固相抗原,经过6轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选和ELISA法、dot blot检测,从中获得了7个抗HIV-1gp120 趋化蛋白受体结合位点的人源Fab抗体克隆。ELISA抑制试验结果显示,获得的7株抗HIV-1gp120 趋化蛋白受体结合位点的噬菌体Fab单克隆抗体对抗HIV-1型抗体阳性者血清的抑制率在68.18%-79.38%,抑制作用明显。67号Fab单克隆抗体的竞争性抑制试验结果显示能抑制抗HIV-l gp120 23肽阳性血清中抗体与 g... 

【文章来源】:中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】:57 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
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前言
第一章 人源抗HIV-1噬菌体Fab抗体库的建立
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第二章 抗HIV-1 gp120 趋化蛋白受体结合位点Fab单克隆抗体的筛选
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第三章 人源抗HIV-1 gp120 阳性噬菌体Fab单克隆抗体基因序列的分析
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
结语
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综述
">    <参考文献>
致谢
研究生在读期间第一作者发表及撰写的文章


【参考文献】:
期刊论文
[1]人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选[J]. 杜桂鑫,于长明,毛春生,王海涛.  中华微生物学和免疫学杂志. 2000(01)
[2]人源性抗HIV-1 V3环噬菌体抗体的基因克隆与序列分析[J]. 毛春生,李季枝,宋宏彬,于长明,杜桂鑫,王海涛.  细胞与分子免疫学杂志. 1999(03)
[3]白细胞趋化因子及其受体[J]. 叶德全.  上海免疫学杂志. 1998(01)
[4]人抗-HBs Fab段基因的序列分析及表达[J]. 王琰,刘群英,徐建军,王雅明,陈竞华.  中华微生物学和免疫学杂志. 1995(05)
[5]人源性噬菌体抗体库的构建及HBsAg人单抗的筛选[J]. 陈竞华,王琰,刘群英,王雅明,徐建军,刘华.  中华微生物学和免疫学杂志. 1995(03)



本文编号:2977044

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