间充质干细胞对造血干/祖细胞分化为巨核细胞的影响

发布时间：2021-01-17 13:49

　　目的:探讨间充质干细胞（MSC）共培养对体外诱导脐带血单个核细胞来源的造血干/祖细胞生成巨核细胞的影响。方法:分离得到骨髓和脐带2种来源的MSC,并对它们进行表面标志和多向分化能力的鉴定,同时通过实时定量PCR及对RT-PCR产物的电泳分析,对比相同培养代数下2种MSC表达造血因子的情况;用梯度离心法分离得到单个核细胞,通过直接接触或Trans-well分隔的方式分别与MSC共培养,观察细胞增殖情况,并检测巨核系特异性的表面标志和相关基因的表达。结果:骨髓和脐带来源的MSC均分泌对巨核细胞增殖分化有促进作用的造血因子,与造血干/祖细胞直接共培养,对于巨核细胞的增殖有明显的促进作用,分化效果不明显;在非接触共培养的条件下,对巨核细胞的增殖及分化都产生促进作用,且骨髓来源的MSC较脐带来源的MSC效果更加明显。结论:MSC与脐带血造血干/祖细胞非接触培养,对其向巨核分化和增殖的促进作用明显,本实验所用的骨髓来源MSC促分化效果更好。本研究为今后进一步优化巨核系诱导分化体系奠定了基础,并对未来体外大规模制备巨核系祖细胞应用于临床治疗有一定的指导作用。 

【文章来源】：生物技术通讯. 2014,25(03)

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

间充质干细胞与单个核细胞直接共培养对造血干细胞向巨核细胞分化的影响

43.7%±1.73%，明显高于脐带非接触培养为36%±1.66%，空白对照组低于上述两组为27.3%±1.3%。可见骨髓和脐带来源的MSC的旁分泌作用有促进巨核分化的能力，但同造血干细胞直接接触的情况下，这种作用的效果就极不明显（图5B）。细胞增殖分析显示，悬浮细胞数在4个共培养组中都明显增加，增长倍数为1.5~2，接触和非接触培养对总有核细胞数的影响没有统计学差异，但在2种不同培养方式中，骨髓来源的MSC均优于脐带来源的MSC，流式细胞术检测表明各组造血前体细胞标志CD34的表达没有明显差异（图5C）。这说明，脐带和骨髓来源的MSC均能够在体外支持造血干/祖细胞的扩增并辅助巨核诱导体系促进巨核系细胞分化，其中本研究使用的脐带来源的MSC对于造血干/祖细胞及巨核祖细胞的支持能力弱于骨髓来源的，并且这种支持作用的差异不论与造血细胞接触与否都能体现，可能是由骨髓细胞分泌更适合巨核分化的生长因子所致。3讨论目前临床上血小板供应紧张，如何在体外获得大量成熟的巨核细胞成为人们关注的焦点。然而巨核分化是一个复杂的过程，须经历造血干细胞向巨核系的分化、巨核祖细胞的扩增，再进行核内染色体的复制，形成多核的能产生血小板的血小板前体细胞[19]。这个过程受造血微环境及各种正负调控因子的影响。MSC虽然在造血微环境中数量不多，但对图55种培养体系对造血干/祖细胞向巨核细胞分化以及分化过程中对细胞增殖的影响A：诱导培养模型；B：流式细胞术分析不同共培养方式对造血干/祖细胞向巨核分化的影响（*P<0.05，**P<0.01）；C：不同共培养方式对造血干/祖细胞向巨核分化过程中细胞增殖的影响（*P<0.05，**P<0.01）曲洺逸等：间充质干细胞对造血干/祖细胞分化为巨核细胞的影响307


本文编号：2983005