白细胞介素-6基因的克

发布时间：2021-01-21 19:58

　　白细胞介素—6在细胞因子网络系统中具有多种生物功能，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染等功能外，还对造血系统有着显著的调节作用，特别是对机体血小板的恢复及骨髓造血功能的重建具有一定的临床应用价值。目前国外开发重组人IL-6已进入Ⅱ期临床试验。我国也将IL-6的开发列为重点项目。 IL-6在体内可由多种细胞产生，如外周血单核细胞、成纤维细胞等。其前体由212个氨基酸构成，成熟肽为184个氨基酸，分子量为21KD—28KD，有两个糖基化位点，但糖基化与否并不影响其生物学活性，有4个半胱氨酸构成的2对二硫键对其生物学活性极为重要。 为了能开发出自己的rhIL-6，我们对IL-6进行了基因克隆、表达调控和中试生产的试探性研究。 从PHA诱导的健康人外周血分离的单核细胞中提取总RNA，经RT-PCR方法克隆了人IL-6 cDNA，DNA序列测定发现除第289位碱基是C与文献报导不同外（国外报导该位点为T），其余顺序与国外报导一致。我们用定点诱变PCR的方法成功地将该位点进行了回复突变，将诱变后的基因插入到pBV220表达载体，并对其SD序列到ATG之间的距离进行了调控研究。将构建的... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

总RNA的凝胶电泳图

3结果3.1细胞总NRA的抽提与RT一pCR采用硫氰酸法抽提的总RNA在1%的琼脂糖凝胶上的可见清晰的185、285RNA条带，且285:185欲:1，说明提取的总RNA是完整的(见图3)。接前面介绍的方法，经RT一PCR后得到一约o.56kb的扩增产物(见图4)，与文献报导的LI一6DcNA大小相符。RT一PCR的引物由本室合成引物15’一GGAATTCACTAGTATGCCAGTACCCCA口GAGAA一3‘Eco班Spel几一65，端顺序引物25，一CG右GATCCTTACATTTGCCGAAGAGCCC一3‘BamHlLl一63’端顺序

PUC18载体中.酶切结果RT一PCR打’‘J钟产物RI+Banl卜11图5pUC18一IL一6质粒构建方s.CnosrtuctionsehemeofPlasnndPJ.孟2一M一


本文编号：2991799