新型人降钙素基因在大肠杆菌中的表达

发布时间：2021-01-21 21:31

　　降钙素是一种重要的肽类激素，在肌体的钙磷代谢，骨的形成、分化和发育等相关的诸多环节中起着关键性作用。降钙素在临床上应用十分广泛，但其自然来源有限，必须以基因工程手段进行大规模生产才能满足需求。原核系统中表达出的降钙素无法完成C-末端的酰胺化，尚需体外处理才能具有较强的生物活性。 本文利用PCR技术扩增新型人降钙素基因编码序列hCT（将编码C-末端脯氨酸的密码子换为编码谷氨酰氨的密码子），将此基因克隆入大肠杆菌非融合型表达载体pBV220及融合型表达载体pET42a中。重组表达载体pET42a／hCT转化到大肠杆菌BL21（DE3）plys中诱导表达，经SDS-PAGE证实细胞裂解物中含有与预期位置相同的融合蛋白，经Western Blot鉴定证明此融合蛋白具有人降钙素的免疫活性。表达条件优化后，可溶性蛋白的表达量占胞内总蛋白的10％。经超滤浓缩后，融合蛋白在Xa因子作用下产生重组的新型降钙素，进一步分离纯化得到该蛋白的初级纯品。大鼠体内降血钙试验表明新型降钙素具有降血钙活性。 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

PCR扩增hCT*基因片段、hCT*:

1、DNAmarke750、5002、PCR扩增图1:PCR扩增hCT*基因片段二、hCT*原核非融合表达载体的构建:(一)重组质粒PBV22O/hCT*的酶切鉴定:重组质电泳可见约3.7Kbp和约IOObpZ条片段，以PB对照酶切产物只见3.7Kbp一条片段，与预期结有约IO0bp目的片段的插入。123

表1hCT含量的放免测定样品放免测定重组质粒表达产物1.472x空质粒表达产物O88x由表1可见，重组质粒PBV22O/hCT*表达但产量很低，我们认为这是大部分表达产物被四、PCR扩增新型人降钙素基因hCT*延长片段第一步PCR扩增出与预期位置符合的约5扩增出与预期位置符合的约543bp片段。1231、第二

【参考文献】：
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本文编号：2991927