动、静脉移植骨髓间充质干细胞治疗急性期脑梗死模型的比较

发布时间：2017-04-11 20:09

  本文关键词：动、静脉移植骨髓间充质干细胞治疗急性期脑梗死模型的比较，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨大鼠缺血再灌注(ischemia-reperfusion)6小时分别经动、静脉途径移植骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)后,对血清肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;缺血半暗带处星形胶质细胞(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)、B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(Bcl-2)、bcl-2相关x蛋白(Bax)、凋亡细胞数、神经功能缺损评分(mNSS)和体重计数的影响以及干细胞在器官分布有无差异,初步探讨BMSCs治疗急性脑梗死的具体机制和比较动、静脉移植途径差异。方法:1、采用改良线栓法栓塞阻隔大鼠大脑中动脉供血供氧,制作MCAO模型。2、采用全骨髓贴壁分离法提取、提纯和扩增培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测鉴定细胞表面抗原,氯甲基苯甲酰胺(CM-dil)染色标记BMSCs以示踪。3、MCAO6小时后分别经颈动脉、尾静脉途径移植等剂量的BMSCs和被标记的BMSCs。4、移植后第7天观察记录神经功能缺损评分和体重计数。5、酶联免疫吸附剂测定血清TNF-α水平。6、免疫组化测定GFAP、VEGF、Bcl-2和Bax表达。7、原位末端标记法测定缺血半暗带处凋亡细胞数。8、荧光观察BMSCs在脑组织、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏和心脏的分布差异。结果:1、流式细胞仪检测细胞表面抗原结果示:CD90表达率为95.7%、CD29表达率为97.3%、CD106表达率为52.7%、CD11b表达率为6.01%、CD34表达率为2.95%、CD45表达率为2.26%。2、颈动脉BMSCs组mNSS评分显著小于颈动脉PBS组,尾静脉BMSCs组mNSS评分显著小于尾静脉PBS组,颈动脉BMSCs和尾静脉BMSCs组相比较mnss评分无差异;颈动脉bmscs体重计数显著大于颈动脉pbs组,尾静脉bmscs组体重计数显著大于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs和尾静脉pbs组体重计数比较无差异。3、gfap阳性细胞主要集中在梗死中心周边缺血半暗带处,移植组阳性细胞数显著大于pbs组,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组相比较无差异。vegf阳性细胞数在缺血半暗带处强表达,尾静脉bmscs组阳性表达强于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs和颈动脉pbs组阳性表达无差异,但颈动脉bmscs组有增高趋势,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组阳性表达无差异。4、vegf在尾静脉bmscs组显著大于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs组和颈动脉pbs组无统计学差异,但颈动脉bmscs组有增高趋势,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组无统计学差异。5、bcl-2阳性细胞普遍见于梗死侧和健侧大脑半球,脑梗死缺血半暗带处阳性表达最为强烈。暂且不论移植途径差异,bmscs组阳性细胞累积光密度值显著多于pbs组。颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组阳性细胞累积光密度值无差异。bax阳性细胞主要集中表达于缺血半暗带处,颈动脉bmscs组、尾静脉bmscs组、颈动脉pbs组和尾静脉pbs组阳性细胞累积光密度值比较无差异。6、颈动脉bmscs组血清tnf-α浓度值显著低于颈动脉pbs组,尾静脉bmscs组显著低于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组血清tnf-浓度值无统计学差异,颈动脉pbs组较尾静脉pbs组血清tnf-α浓度值有增高趋势,但无统计学差异。7、凋亡细胞主要出现在缺血半暗带处,健侧未见阳性细胞。bmscs组凋亡细胞数显著小于pbs组,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组阳性细胞数无差异。8、示踪标记的bmscs主要集中于肺脏和脾脏,梗死周围组织可见干细胞分布,健侧未见;肝脏和肾脏干细胞分布较少,心脏未见干细胞荧光信号,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组中同一器官干细胞分布数量无统计学差异。结论:bmscs可通过增强gfap、vegf的表达,维持神经血管单元的完整性,增加bcl-2的表达、减少凋亡细胞数,降低炎症因子tnf-α水平,以促进缺血再灌注后神经功能的恢复。在缺血再灌注6小时经颈动脉和尾静脉途径移植bmscs后干细胞在各器官分布和疗效无差异。但尾静脉途径创伤微小,可接受细胞量多,为脑梗死早期最佳移植途径。
【关键词】：缺血再灌注 脑梗死 骨髓间充质干细胞 移植 凋亡 动物模型
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3;R-332
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英缩略词表11-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 材料与方法14-24
• 2.1 实验动物及分组14
• 2.2 试剂14-15
• 2.3 仪器15-16
• 2.4 手术材料和器械16
• 2.5 BMSCs分离、培养、扩增、鉴定和染色16-17
• 2.6 MACO模型制作17-18
• 2.7 神经功能缺损评分18-19
• 2.8 移植19
• 2.9 体重测量及材料获取19-20
• 2.10 免疫组化20
• 2.11 TUN EL检测20-21
• 2.12 ELISA检测21-22
• 2.13 图片采集和分析22-23
• 2.14 数据处理统计分析23-24
• 第3章 结果24-35
• 3.1 BMSCs鉴定和荧光标记24-25
• 3.2 MCAO模型体重及mNSS变化25-26
• 3.3 免疫组化结果26-32
• 3.4 血清ELISA检测结果32
• 3.5 BMSCs全身主要器官分布及其数量差异32-35
• 第4章 讨论35-38
• 第5章 结论与展望38-39
• 5.1 结论38
• 5.2 展望38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-43
• 附录43-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 综述45-53
• 参考文献50-53

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