丙型肝炎病毒核心抗原基因片段的克

发布时间：2021-02-07 04:18

　　丙型肝炎病毒（HCV）是导致慢性肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌的重要病原体之一，全世界有1.7亿人被HCV感染，约占全球人口的3％。目前，尚无有效的丙型肝炎预防疫苗及治疗药物，因此对HCV感染的早期诊断是有效控制丙型肝炎传播的重要手段。 目前，HCV的实验室诊断技术主要有血清HCV RNA、抗-HCV抗体及HCV抗原检测。PCR检测HCV RNA是目前HCV诊断最灵敏、特异的方法，但其操作比较复杂，易造成污染，且价格昂贵，不适于大规模的筛查应用。丙型肝炎患者血清中的抗原水平很低，常规的免疫学、病毒学方法难以获得阳性结果，因此，血清HCV抗原检测尚不能作为一种实验室的常规检测手段。目前，临床上应用最多的方法仍是以检测血清抗-HCV抗体为主。 抗-HCV抗体检测方法主要包括酶联免疫吸附法（ELISA）和重组免疫印迹法（RIBA），其中RIBA是ELISA的确证方法，其试剂较为昂贵，难以普及。抗-HCV ELISA具有敏感性高、特异性强、简便快速，适于大规模检测等特点，其敏感性和特异性主要是依赖于不同抗原或其表位的选择，不同的抗原或同一抗原的不同表位对抗-HCV抗体的检测结果有显著差异... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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缩略词
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英文摘要
前言
第一部分 丙型肝炎病毒核心抗原基因片段重组表达载体的构建
    材料和方法
        一、 材料
        二、 实验方法
            （一） 引物设计
            （二） PCR扩增
            （三） 目的基因的克隆
                1 质粒DNA的制备及酶切
                2 目的基因片段的纯化、酶切
                3 质粒大片段及目的基因片段的分离和回收
                4 目的基因片断与载体的连接反应
                5 感受态细胞的制备
                6 转化
            （四） 重组克隆的筛选及鉴定
                1 初步鉴定
                2 酶切鉴定
            （五） C119基因序列测定及同源性分析
    结果
        一、 C119基因的扩增
        二、 重组克隆的筛选及鉴定
        三、 序列的测定及同源性分析
    讨论
    小结
第二部分 重组蛋白的表达、纯化及抗原性研究
    材料和方法
        一、 材料
        二、 实验方法
            （一） C119工程菌的发酵
            （二） 表达产物的溶解性分析
            （三） 表达产物的纯化
            （四） 纯化后蛋白的含量测定
            （五） 表达产物及纯化后蛋白的SDS-PAGE分析
            （六） 表达产物及纯化后蛋白Western-blot分析
            （七） 纯化后蛋白用于临床血清的ELISA检测
                （一） 敏感性和特异性
                （二） 重复性试验
    结果
        一、 重组质粒的表达
            （一） 诱导时机的优化
            （二） 诱导时间的优化
            （三） 诱导剂浓度的优化
        二、 表达蛋白的纯化
        三、 纯化后蛋白含量的测定
        四、 表达产物及纯化后蛋白Western-blot分析
        五、 纯化后的蛋白用于ELISA检测
            （一） 敏感性和特异性
            （二） 重复性试验
    讨论
    小结
总结
研究展望
参考文献
致谢
综述
附录: 论文发表情况



本文编号：3021643