微丝骨架在DENV2感染过程中作用的研究

发布时间：2021-02-11 22:30

　　登革病毒（dengue virus,DENV）是黄病毒属、有包膜的的单股正链RNA病毒,由于包膜蛋白的抗原性不同,它分为四种血清型,即DENV1⁴。DENV以蚊虫为媒介广泛流行于热带和亚热带地区。每年,登革病毒会导致数百万人感染,引起登革热（denque classical fever,DF）和登革出血热/休克综合症（dengue hemorrhagic fever/ dengue shock syndrome, DHF/DSS）。DF是自限性发热性疾病;而DHF/DSS则是威胁患者生命的重症,其主要特征是血管通透性显著增加,导致血浆渗漏。每年有大约50万DHF/DSS患者需要及时入院治疗,否则病死率高达50%。然而,DHF/DSS的发病机制,以及DENV与宿主细胞之间相互作用的机制尚不清楚。DENV只有一个开放阅读框（ORF）,编码三种结构蛋白和七种非结构蛋白,从5’端到3’端依次为5’-C-prM（M）-E-NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS4b-NS5-3’。DENV最外层的包膜是有包膜糖蛋白（envelope protein, E）二聚体组... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：60 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

细胞微丝骨架在DENV2感染后的排布变化

丝骨架干扰药物影响 DENV2 的进入效率为了研究微丝骨架在 DENV2 进入细胞过程中的作用，本实验主要观察药物毒感染率的变化。首先，用不同浓度的 jas 和 cyt D 处理 Vero 细胞 5、3 或 1入 DENV2( 100～200 PFU)感染 1 小时。结果显示，jas 和 cyt D 均能抑制 D染率，且抑制效果与药物预作用时间和药物剂量呈现一定的依赖关系(图 2)。度组中，预处理 1 小时对感染率几乎没有影响； jas 高浓度预处理 5 小时后降为对照组的 75％左右。与 jas 比较，cyt D 预处理对 DENV2 感染效率的抑为显著。cyt D 低浓度预处理 1 小时后，感染率降为对照组的 85％；而 cyt D处理 5 小时或 3 小时后，感染率仅为对照组的 50％左右。这些结果提示干扰能够降低 DENV2 的感染效率。

结果提示病毒释放可能更需要微丝自由地进行再聚合。通过计算上清病毒滴度：细胞内病毒滴度的比值与对照组相比的百分比值，进一步证实了上述推测。结果显示，随着作用时间的减少，jas 组的比值由 60％逐渐恢复至 100％。而 cytD 组的比值始终低于对照组，尤其是药物作用于 3～9 小时或 6～9 小时时，比值仅为 50％(图 3)，提示病毒释放受到了抑制。免疫荧光染色结果证实，药物持续作用导致 DENV2 抗原在胞内的大量堆积。病毒感染之后，立即加入 jas 或 cytD 并持续作用 72 小时，结果发现大量病毒抗原以团块状分布在胞浆中(尤其是胞核附近)， 而模拟感染组中，病毒抗原较有规律地分布在胞核的一侧，荧光强度明显弱于药物处理组(图 4)，结果表明干扰微丝骨架系统抑制了DENV2 的释放。综合以上结果，我们认为 3～9 小时是 DENV2 释放的关键时期，而病毒在释放的过程中需要微丝自由地进行再聚合。


本文编号：3029815