小鼠睾丸及不育患者精液中精子细胞的分离与鉴定

发布时间：2021-02-12 03:51

　　1995年，人类首次利用圆形精子细胞和长形精子细胞体外授精获得成功后，预示着精子细胞显微注射授精可用于治疗临床无法治愈的男性不育患者。目前，完全不能产生精子的非梗阻性无精子症（non-obstmctive azoospermia,NOA）患者可采用卵胞质内圆形精子细胞注射（round spermatid injection,ROSI）或长形精子细胞注射（elongated spermatid inection,ELSI）治疗，精子细胞可从精液或从睾丸活检组织中获取。甚至已经有采用冻融睾丸组织中精子细胞行ROSI后获得持续妊娠的报告。 但精子细胞的受精率和妊娠率令人失望，限制这项技术成功和阻碍其临床应用的许多问题仍然没有解决。除精子细胞的核蛋白不完全成熟及卵子激活不足等因素外，如何正确选择存活精子细胞是个难题，如圆形精子细胞与精母细胞、单核细胞和多形核白细胞等其他圆形细胞的区分就比较困难。另一方面，已经报道了多种不同的方法可从睾丸中分离精子细胞。最常用的是机械方法，即利用细针将活检获得的小块睾丸组织撕开，释放出精子细胞；也可利用酶将睾丸组织消化成细胞悬液，其中包含所有类型的生精细胞... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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引言
第一部分 小鼠睾丸精子细胞的分离与鉴定
    1 材料与方法
        1.1 实验动物、主要试剂与器材
        1.2 试剂配制
        1.3 制备小鼠睾丸细胞悬液
        1.4 Percoll梯度分离
        1.5 细胞密度测定
        1.6 伊红Y排斥试验
        1.7 瑞-姬染色
        1.8 流式细胞术测定
        1.9 卵胞质内精子细胞显微注射
        1.10 统计学处理
    2 结果
        2.1 组合酶消化结果
        2.2 Percoll梯度分离
        2.3 精子细胞显微注射
    3 分析与讨论
第二部分 不育患者精液中精子细胞的分离与鉴定
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂与仪器
        1.2 精液标本
        1.3 非连续Percoll梯度分离
        1.4 瑞-姬染色
        1.5 细胞计数
        1.6 流式细胞术测定
        1.7 免疫细胞化学测定
        1.8 荧光原位杂交（FISH）
        1.9 统计学处理
    2 结果
        2.1 细胞染色
        2.2 细胞计数
        2.3 流式细胞术
        2.4 免疫细胞化学
        2.5 FISH
    3 分析与讨论
小结
参考文献
研究生期间主要学术成果
致谢
综述及参考文献
    精子细胞显微注射授精



本文编号：3030211