痤疮丙酸杆菌对IPEC-J2细胞的免疫调节作用及作用机理

发布时间：2017-04-14 03:15

  本文关键词：痤疮丙酸杆菌对IPEC-J2细胞的免疫调节作用及作用机理，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的痤疮丙酸杆菌作为最早定植于哺乳动物肠道中的微生物,它与肠道细胞的互作关系以及对肠道细胞的影响一直未被研究。本研究通过痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌与IPEC-J2细胞共培养,观察二者对IPEC-J2细胞的生物学影响,以探讨痤疮丙酸杆菌在肠道所起的作用。方法通过LDH法检测痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞膜的损伤率;在正置显微镜下观察经HE染色后的细胞形态变化;荧光定量PCR检测紧密连接蛋白ZO-1和occludin m RNA的表达变化。采用MTS法和台盼蓝拒染法检测与痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌共培养的IPEC-J2细胞活性与存活率;通过倒置显微镜观察细胞形态变化;通过荧光定量PCR法检测3种TLR受体、5种促炎细胞因子和2种抗炎细胞因子基因表达的变化。结果痤疮丙酸杆菌活菌对于IPEC-J2细胞膜具有一定的损伤性,并呈浓度依赖性;HE染色显示高浓度的痤疮丙酸杆菌活菌可致IPEC-J2细胞膜间隙变大;荧光定量PCR结果阐明痤疮丙酸杆菌活菌可明显下调ZO-1 m RNA的表达;对occludin m RNA的表达不产生影响。高浓度(1×108 CFU/m L)的痤疮丙酸杆菌活菌能明显降低IPEC-J2细胞的活性率和存活率,在倒置显微镜下可以观察到细胞出现核皱缩,凸显等现象。促炎因子与抗炎因子的荧光定量PCR结果显示,痤疮丙酸杆菌活菌能够显著上调促炎因子的表达,而对抗炎因子的表达没有作用。在IPEC-J2细胞中未检查到IL-10 m RNA的表达。TLR受体的荧光定量PCR检测结果表明痤疮丙酸杆菌活菌可以显著上调TLR9 m RNA的表达,对TLR2和TLR4的基因表达无明显影响。灭活的痤疮丙酸杆菌在以上实验结果中表现出的差异均无统计学上的意义。结论综上所述,较高浓度的痤疮丙酸杆菌活菌可能通过下调IPEC-J2细胞内连接蛋白ZO-1 m RNA的表达而影响细胞中紧密连接功能;通过上调促炎因子的表达,而改变了促炎因子与抗炎因子在IPEC-J2细胞中的动态平衡。由于细胞膜间隙的增大和炎症因子的表达失衡可能是诱发炎症反应,导致细胞死亡的原因。这一系列的生物反应可能是通过激活TLR9受体的表达而介导的,但具体机制仍不明确,还需进一步研究证实。
【关键词】：痤疮丙酸杆菌 IPEC-J2细胞 细胞因子 Toll样受体 紧密连接
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-16
• 第一部分 两种菌种保藏方式的比较以及灭活温度的探究16-21
• 1 材料16-17
• 1.1 细菌16
• 1.2 主要试剂和耗材16
• 1.3 主要仪器设备16-17
• 2 方法17-18
• 2.1 痤疮丙酸杆菌的活化与培养17
• 2.2 痤疮丙酸杆菌的保藏17-18
• 2.3 两种保藏方法的比较18
• 2.4 热灭活对痤疮丙酸杆菌存活率的影响18
• 3 结果18-19
• 3.1 时间对两种菌种保藏方法的影响18
• 3.2 不同灭活温度对痤疮丙酸杆菌存活率的影响18-19
• 4 讨论19-21
• 第二部分 痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞膜通透性及紧密连接的影响21-32
• 1 材料21-23
• 1.1 细菌与细胞21-22
• 1.2 主要试剂和耗材22
• 1.3 主要仪器设备22-23
• 2 方法23-27
• 2.1 痤疮丙酸杆菌的培养及灭活23
• 2.2 显微镜镜检实验23-24
• 2.3 LDH法检测IPEC-J2细胞膜损伤率24-25
• 2.4 Real-Time PCR检测目的基因的表达25-27
• 3 结果27-30
• 3.1 痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞膜间隙的影响27-28
• 3.2 IPEC-J2细胞损伤率的变化28-29
• 3.3 occludin和ZO-1 的表达变化29-30
• 4 讨论30-32
• 第三部分 痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞生长及相关TLR样受体和细胞因子的表达32-42
• 1 材料32-33
• 1.1 细菌与细胞32
• 1.2 主要试剂和耗材32-33
• 1.3 主要仪器设备33
• 2. 方法33-36
• 2.1 IPEC-J2细胞生长曲线的绘制33
• 2.2 显微镜镜检实验33
• 2.3 细胞毒性实验33-34
• 2.4 台盼蓝拒染实验34
• 2.5 Real-Time PCR检测目的基因的表达34-36
• 3 结果36-40
• 3.1 IPEC-J2细胞的生长曲线36
• 3.2 痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞形态学改变36-37
• 3.3 痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞活性率的影响37-38
• 3.4 痤疮丙酸杆菌活菌和灭活菌对IPEC-J2细胞存活率的影响38
• 3.5 TLR样受体和细胞因子表达变化38-40
• 4 讨论40-42
• 4.1 促炎与抗炎因子动态失衡可能导致肠道炎症的发生和细胞的坏死40-41
• 4.2 介导炎症反应的TLR受体41-42
• 全文总结42-43
• 展望43-44
• 参考文献44-49
• 附录一 硕士期间发表的论文49-50
• 附录二 缩写词及中英文对照表50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 邓宸玺;王自蕊;游金明;瞿明仁;叶亚玲;辛向荣;潘珂;;丙氨酰-谷氨酰胺二肽对仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin定位与表达的影响[J];动物营养学报;2014年03期

2 徐昕怡;张s，

本文编号：305087