铜绿假单胞菌ATCC27853对秀丽隐杆线虫的毒性研究

发布时间：2017-04-14 02:10

  本文关键词：铜绿假单胞菌ATCC27853对秀丽隐杆线虫的毒性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究在不同培养基上生长的铜绿假单胞菌ATCC27853对秀丽隐杆线虫生殖、寿命、生长发育和脂肪储存的影响；观察铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫药物代谢酶通路上cyp35家族基因表达的影响；探讨铜绿假单胞菌毒性分泌物对秀丽隐杆线虫的致病机制和毒性作用。方法：建立铜绿假单胞菌-秀丽隐杆线虫细菌感染模型,观察各组培养基上秀丽隐杆线虫寿命、产卵量、生长发育、脂肪储存和运动情况；提取秀丽隐杆线虫总RNA,通过实时荧光定量PCR分析铜绿假单胞菌分泌的毒性物质对毒物-药物代谢酶P450代谢通路上cyp35家族基因表达的调控作用；用油红O对四组秀丽隐杆线虫成虫染色,观察铜绿假单胞菌对体内脂肪含量的影响；紫外分光光度计检测四组不同液体培养的铜绿假单胞菌菌液中细菌密度、绿脓菌素和弹性蛋白酶及外分泌蛋白的浓度。结果：1.不同培养基生长的铜绿假单胞菌感染秀丽隐杆线虫后,各实验组平均生存时间和产卵量均低于对照组(P0.05),秀丽隐杆线虫生长发育缓慢,运动的灵活性降低；2.秀丽隐杆线虫感染铜绿假单胞菌后体内的cyp35A1、cyp35A2、cyp35A5和cyp35C1等毒物-药物代谢基因表达均上调；3.秀丽隐杆线虫摄食铜绿假单胞菌后体内脂肪的储存减少；4.在LB培养基中生长的铜绿假单胞菌释放的绿脓菌素浓度最高,而在TSA培养基上培养的铜绿假单胞菌释放的弹性蛋白和外分泌蛋白浓度最高(P0.01)。结论：铜绿假单胞菌的增殖和毒力受生长环境影响,培养基不同,各种毒性分泌物比例不同,对秀丽隐杆线虫的毒性也不同。同时秀丽隐杆线虫体内cyp35A1、cyp35A2、cyp35A5和cyp35C1等毒物-药物代谢通路上相关基因表达上调,说明cyp35家族基因对铜绿假单胞菌毒素代谢密切相关。弹性蛋白酶和绿脓菌素是铜绿假单胞菌导致线虫死亡的主要毒力因子,弹性蛋白酶可能是TSA培养基上培养的铜绿假单胞菌引起秀丽隐杆线虫快速致死的主要因素,而绿脓菌素是导致秀丽隐杆线虫生长发育缓慢的最主要因素；QS密度感应系统在对秀丽隐杆线虫的感染中发挥着重要调节作用。
【关键词】：秀丽隐杆线虫 铜绿假单胞菌 cyp35 绿脓菌素
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一部分 前言9-17
• 1.1 秀丽隐杆线虫9-12
• 1.1.1 秀丽隐杆线虫的发现与生物学特性9-11
• 1.1.2 秀丽隐杆线虫-细菌感染模型的建立与应用11-12
• 1.2 铜绿假单胞菌的致病性12-14
• 1.3 铜绿假单胞菌-秀丽隐杆线虫细菌感染模型的研究进展14
• 1.4 秀丽隐杆线虫细胞色素P450和cyp35家族基因的研究进展14-17
• 第二部分 实验材料和方法17-25
• 2.1 实验材料17
• 2.2 实验试剂与药品17
• 2.3 实验设备和仪器17-18
• 2.4 实验方法18-25
• 2.4.1 培养基配制18-19
• 2.4.2 铜绿假单胞菌和大肠杆菌(E.coli OP50)的培养、保存和复苏19
• 2.4.3 秀丽隐杆线虫的培养、保存和复苏19-20
• 2.4.4 细菌感染模型的建立20
• 2.4.5 寿命的测定20
• 2.2.6 生殖率的测定20-21
• 2.4.7 运动能力的测定21
• 2.4.8 秀丽隐杆线虫体长的观察21
• 2.4.9 线虫总RNA的提取及反转录21-23
• 2.4.10 秀丽隐杆线虫脂肪染色23-24
• 2.4.11 不同液体培养液中铜绿假单胞菌的密度和毒性分泌物的测定24-25
• 第三部分 实验结果25-33
• 3.1 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫寿命、生殖和运动能力的毒性作用25-29
• 3.1.1 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫寿命的影响25-27
• 3.1.2 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫生殖的抑制作用27-28
• 3.1.3 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫生长发育的抑制作用28
• 3.1.5 秀丽隐杆线虫感染后铜绿假单胞菌后运动行为的变化28-29
• 3.2 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫体内cyp35家族基因中A1、A2、A5、C1表达的调控作用29-31
• 3.2.1 秀丽隐杆线虫RNA的提取29
• 3.2.2 秀丽隐杆线虫体内cyp35家族基因中A1、A2、A5和C1的表达上调29-30
• 3.2.3 荧光定量PCR产物的验证30-31
• 3.3 铜绿假单胞菌减少秀丽隐杆线虫体内的脂肪储存量31
• 3.4 铜绿假单胞菌在不同培养基上的生长特点31-33
• 3.4.1 四组液体培养基中铜绿假单胞菌产绿脓菌素的分泌特点31-32
• 3.4.2 不同固体培养基上铜绿假单胞菌菌苔特征32-33
• 第四部分 讨论33-39
• 4.1 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫寿命、生长发育、生殖和运动能力的毒性作用33-35
• 4.1.1 铜绿假单胞菌对寿命的影响33-34
• 4.1.2 铜绿假单胞菌对生长发育和生殖的抑制作用34-35
• 4.1.3 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫运动能力的影响35
• 4.2 铜绿假单胞菌毒性分泌物对秀丽隐杆线虫cyp35家族基因表达的调控作用35-37
• 4.4 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫体内脂肪储存的影响37-38
• 4.5 铜绿假单胞菌对秀丽隐杆线虫的毒力38-39
• 结论39
• 研究展望39-40
• 参考文献40-45
• 英文缩略词汇45-46
• 在学期间的研究成果46-47
• 致谢47

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