当前位置:主页 > 医学论文 > 病理论文 >

肺炎克雷伯菌调控蛋白RcsAB的构建表达及活性鉴定

发布时间:2021-02-28 16:06
  为了探讨转录调控子Rcs AB对靶基因的转录调控作用,构建肺炎克雷伯菌RcsA和RcsB的重组质粒,之后诱导蛋白表达,提取纯化后测定其活性。PCR得到rcsA、rcsB片段,分别将两DNA片段克隆至表达载体pMAL-C5X、pET28a,构建重组质粒。再将重组质粒导入E. coli BL21(DE3)菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,超声破碎。破碎后的上清过柱、透析纯化,得到高纯度的蛋白,通过EMSA进行蛋白活性鉴定。RcsA,RcsB蛋白成功表达纯化,并能够与靶基因结合,初步证明蛋白具有生物学活性。成功制备有生物学活性的RcsA、RcsB蛋白,为进一步研究RcsAB蛋白复合物特异的生物学功能提供物质基础。 

【文章来源】:基因组学与应用生物学. 2019,38(02)北大核心

【文章页数】:6 页

【文章目录】:
1 结果与分析
    1.1 成功构建重组质粒
    1.2 蛋白的表达与纯化
    1.3 RcsAB活性鉴定
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株、质粒与引物
        3.1.2 主要仪器与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 重组质粒的构建
        3.2.2 目的蛋白的表达和纯化
        3.2.3 RcsAB的靶基因片段制备
        3.2.4 EMSA测蛋白活性
作者贡献



本文编号:3056098

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/binglixuelunwen/3056098.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户6618e***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com