间充质干细胞对B细胞增殖及免疫调节功能的影响
发布时间:2021-03-01 09:40
【目的】研究观察间充质干细胞(MSC)在体外培养体系对B细胞增殖和免疫调节作用的影响。【方法】采用密度梯度离心法分离健康捐献者来源的骨髓30 mL。用含100 mmol/L胎牛血清的L-DMEM培养基对分离出的MSC进行贴壁培养。培养至第6代时,进行多向分化和细胞表型鉴定。获取健康供者外周血单个核细胞,并通过流式细胞仪分选出CD19+B细胞,进行荧光染料CFSE标记,然后分成单独培养组(CD19+B细胞)和共培养组(按CD19+B∶MSC:=5∶1的比例共培养),两组均采用CpG+CD40L刺激,96 h后检测B细胞的增殖情况,并通过流式细胞荧光分选技术(FACS)检测CD19+CD5+B细胞的百分比及其分泌的IL-10水平;进一步观察单独培养组和共培养组的CD19+B细胞对CD4+T细胞增殖以及分泌IFN-γ的影响,最后加入IL-10中和抗体,再次验证B细胞对CD4+T细胞增殖以及分泌IFN-γ的影响。【结果】...
【文章来源】:中山大学学报(医学版). 2019,40(02)北大核心
【文章页数】:9 页
【部分图文】:
MSC体外诱导分化及表面标记分子Fig.1MSCinduceddifferentiationandphenotypeinvitroDCDCounA:Adherentandspindle-shapedMSC(100×);B:Alizarinredstaining(100×);C:Oilredstaining;D:MSCphenotype
:Thebargraphsindicatethemeans±SD.1)P=0.003,n=3.图3MSC促进CD19+B细胞分泌IL-10Fig.3MSCenhancestheIL-10secretionofCD19+BcellsCD19+BCD19+B+MSCF:31.97%F:42.73%CFSE1)CD19+BCD19+B+MSC50403020100CFSEpostivecelnumber/%CelnumberABA:TheB-cellproliferativeresponsewasevaluatedbytheCFSE;B:Thebargraphsindicatethemeans±SD.1)P=0.016,n=3.图2MSC促进CD19+B细胞增殖Fig.2MSCpromotesproliferationofCD19+Bcells2.2MSC在体外促进B细胞的增殖及其分泌IL-10为了探讨MSC在体外对调节性B细胞免疫调节功能的影响,我们首先对MSC在体外对B细胞增殖及分泌相关因子功能的影响进行了研究观察。我们利用CFSE荧光标记系统来评估B细胞的增殖情况,结果发现:单独培养组中B细胞增殖的比例为(33.13±1.11)%;共培养组中B细胞增殖的比例为(42.30±0.58)%,以上实验细胞均重复3次,经统计学分析,两组之间的比较有统计学差异(t=2.6,P=0.016,图2A、B)。IL-10是炎症反应中重要的抑炎因子。为了进一步分析MSC对B细胞免疫调节的影响,我们又对MSC在体外是否具有促进B细胞分泌抑炎症因子进行了研究。结果我们发现,在采用CpG+重组人可溶性CD40L预先刺激B细胞的条件下,共培养组分泌IL-10的B细胞的比例由(0.48±0.04)%增加至1.25%±0.07%,与单独培养组的B细胞比较,两组之间的差异有统计学意义(t=3.7,P=0.003
means±SD.1)P<0.01,2)P<0.05,n=3.图5MSC增强CD19+B细胞抑制CD4+T细胞分泌IFN-γFig.5MSCenhancestheabilityofCD19+BcellstoinhibitthesecretionofIFN-γbyCD4+TcellsCD4+TBCell+MSCBCellCD4IFN-γ12.964.266.321)2)CD4+TBCell+MSCBCell201612840IFN-γ/%ABA:TheTcellandBcellproliferationwasevaluatedbytheCFSEdilution;B:Thebargraphsindicatethemeans±SD.1)P<0.01,2)P<0.05,n=3图4MSC增强CD19+B细胞对CD4+T细胞增殖的抑制能力Fig.4MSCenhancestheabilityofCD19+BcellstoinhibitCD4+TcellsCD4+TBCell+MSCBCellCelnumberCFSE1)2)CD4+TBCell+MSCBCell806040200CFSEpostivecelnumber/%AB59.29%24.78%33.51%胞仪对CD19+B细胞相关亚群细胞进行了分析,结果我们发现,共培养组中CD19+CD5+B细胞亚群的比例明显增加,而其它调节性B细胞亚群中CD27+CD24hiB细胞与CD38hiCD24hiB细胞反而呈减少趋势(图6A、B,7A)。我们已在前面的研究中发现MSC能促进B淋巴细胞的增殖并且能增加其IL-10的分泌,而CD19+B细胞与MSC共培养后,能明显抑制CD4+T细胞的增殖并减少其IFN-γ的分泌水平,这是否与其分泌IL-10相关?因此,我们又继续分析B细胞中具有分泌IL-10的CD5+B细胞亚群,结果我们发现,共培养组中CD5+B细胞数量的百分比由单独培养条件下的(21.31±1.22?
【参考文献】:
期刊论文
[1]间充质干细胞免疫调控功能及临床应用[J]. 杨燕美,江小霞,温宁. 中国组织工程研究. 2017(17)
[2]系统性红斑狼疮患者血浆降低间充质干细胞对B淋巴细胞的抑制作用[J]. 聂瑛洁,罗利梅,查艳,孙立,骆辑,潘润桑,田晓滨. 南方医科大学学报. 2016(08)
[3]羊水、脐带和骨髓来源间充质干细胞对淋巴细胞增殖的抑制效果比较[J]. 朱海鹏,彭亮,王培培,杜巍,殷思纯,李发武. 新医学. 2013(11)
本文编号:3057299
【文章来源】:中山大学学报(医学版). 2019,40(02)北大核心
【文章页数】:9 页
【部分图文】:
MSC体外诱导分化及表面标记分子Fig.1MSCinduceddifferentiationandphenotypeinvitroDCDCounA:Adherentandspindle-shapedMSC(100×);B:Alizarinredstaining(100×);C:Oilredstaining;D:MSCphenotype
:Thebargraphsindicatethemeans±SD.1)P=0.003,n=3.图3MSC促进CD19+B细胞分泌IL-10Fig.3MSCenhancestheIL-10secretionofCD19+BcellsCD19+BCD19+B+MSCF:31.97%F:42.73%CFSE1)CD19+BCD19+B+MSC50403020100CFSEpostivecelnumber/%CelnumberABA:TheB-cellproliferativeresponsewasevaluatedbytheCFSE;B:Thebargraphsindicatethemeans±SD.1)P=0.016,n=3.图2MSC促进CD19+B细胞增殖Fig.2MSCpromotesproliferationofCD19+Bcells2.2MSC在体外促进B细胞的增殖及其分泌IL-10为了探讨MSC在体外对调节性B细胞免疫调节功能的影响,我们首先对MSC在体外对B细胞增殖及分泌相关因子功能的影响进行了研究观察。我们利用CFSE荧光标记系统来评估B细胞的增殖情况,结果发现:单独培养组中B细胞增殖的比例为(33.13±1.11)%;共培养组中B细胞增殖的比例为(42.30±0.58)%,以上实验细胞均重复3次,经统计学分析,两组之间的比较有统计学差异(t=2.6,P=0.016,图2A、B)。IL-10是炎症反应中重要的抑炎因子。为了进一步分析MSC对B细胞免疫调节的影响,我们又对MSC在体外是否具有促进B细胞分泌抑炎症因子进行了研究。结果我们发现,在采用CpG+重组人可溶性CD40L预先刺激B细胞的条件下,共培养组分泌IL-10的B细胞的比例由(0.48±0.04)%增加至1.25%±0.07%,与单独培养组的B细胞比较,两组之间的差异有统计学意义(t=3.7,P=0.003
means±SD.1)P<0.01,2)P<0.05,n=3.图5MSC增强CD19+B细胞抑制CD4+T细胞分泌IFN-γFig.5MSCenhancestheabilityofCD19+BcellstoinhibitthesecretionofIFN-γbyCD4+TcellsCD4+TBCell+MSCBCellCD4IFN-γ12.964.266.321)2)CD4+TBCell+MSCBCell201612840IFN-γ/%ABA:TheTcellandBcellproliferationwasevaluatedbytheCFSEdilution;B:Thebargraphsindicatethemeans±SD.1)P<0.01,2)P<0.05,n=3图4MSC增强CD19+B细胞对CD4+T细胞增殖的抑制能力Fig.4MSCenhancestheabilityofCD19+BcellstoinhibitCD4+TcellsCD4+TBCell+MSCBCellCelnumberCFSE1)2)CD4+TBCell+MSCBCell806040200CFSEpostivecelnumber/%AB59.29%24.78%33.51%胞仪对CD19+B细胞相关亚群细胞进行了分析,结果我们发现,共培养组中CD19+CD5+B细胞亚群的比例明显增加,而其它调节性B细胞亚群中CD27+CD24hiB细胞与CD38hiCD24hiB细胞反而呈减少趋势(图6A、B,7A)。我们已在前面的研究中发现MSC能促进B淋巴细胞的增殖并且能增加其IL-10的分泌,而CD19+B细胞与MSC共培养后,能明显抑制CD4+T细胞的增殖并减少其IFN-γ的分泌水平,这是否与其分泌IL-10相关?因此,我们又继续分析B细胞中具有分泌IL-10的CD5+B细胞亚群,结果我们发现,共培养组中CD5+B细胞数量的百分比由单独培养条件下的(21.31±1.22?
【参考文献】:
期刊论文
[1]间充质干细胞免疫调控功能及临床应用[J]. 杨燕美,江小霞,温宁. 中国组织工程研究. 2017(17)
[2]系统性红斑狼疮患者血浆降低间充质干细胞对B淋巴细胞的抑制作用[J]. 聂瑛洁,罗利梅,查艳,孙立,骆辑,潘润桑,田晓滨. 南方医科大学学报. 2016(08)
[3]羊水、脐带和骨髓来源间充质干细胞对淋巴细胞增殖的抑制效果比较[J]. 朱海鹏,彭亮,王培培,杜巍,殷思纯,李发武. 新医学. 2013(11)
本文编号:3057299
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