抗CEACAM5纳米抗体在大肠杆菌中的高效周质表达

发布时间：2021-03-01 12:12

　　纳米抗体具有相对分子质量小、稳定性高、特异性强以及能够穿过血脑屏障等众多优势,而且其能够通过大肠杆菌、酵母等简单微生物大量表达。大肠杆菌周质表达纳米抗体是目前纳米抗体制备主要的方法之一,但是纳米抗体的表达水平还相对较低。以pET22b和pMES4为载体构建了两种重组表达质粒,并且比较了他们在不同宿主菌中表达纳米抗体的情况。结果表明,以pMES4为载体的大肠杆菌能够在周质中可溶性表达纳米抗体,而以pET22b为载体的大肠杆菌表达的纳米抗体无法分泌到周质空间中。随后,通过IPTG浓度优化及5 L发酵罐过程,控制实现了纳米抗体在大肠杆菌周质中的表达量达到308. 32 mg/L。研究提供了一种高效表达纳米抗体的方法,为纳米抗体的规模化制备奠定了技术基础。 

【文章来源】：科学技术与工程. 2019,19(01)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 实验材料
    1.2 主要仪器
2 方法
    2.1 p ET22b-2D5和p MES4-2D5表达载体的构建
    2.2 转化及阳性克隆子筛选
    2.3 摇瓶表达实验
    2.4 发酵罐表达实验
    2.5 ELISA分析
    2.6 Western印迹表达分析
    2.7 周质蛋白分离纯化和BCA定量方法
    2.8 纳米抗体亲和力的动力学分析
3 结果与讨论
    3.1 重组表达载体的构建
    3.2 p ET22b-2D5和p MES4-2D5在不同宿主菌中
    3.3 IPTG浓度对不同宿主菌表达纳米抗体的影响
    3.4 发酵罐表达
    3.5 纳米抗体分离纯化
    3.6 纳米抗体2D5亲和力分析
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]癌胚抗原对直结肠偶发高代谢灶良恶性判断[J]. 王志忠,张婷,王钦媛,周晓红,刘晓飞,苏家贵,欧阳晓辉,何宝明.  科学技术与工程. 2016(22)
[2]治疗性单克隆抗体研究进展[J]. 孙思凡,张部昌,靳彦文.  生物技术通讯. 2009(02)
[3]单克隆抗体制备技术及应用的研究进展[J]. 胡春艳,刘全忠.  安徽预防医学杂志. 2008(02)
[4]基因工程抗体研究进展[J]. 王秀红,周素芳.  生物技术通讯. 2007(02)



本文编号：3057461