猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其表达

发布时间：2021-03-03 16:50

　　目的构建猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,分析猪带绦虫TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。方法采用PCR方法从重组质粒pGEX-TSOL18中扩增TSOL18基因,克隆入pMV361载体,构建pMV361-TSOL18穿梭质粒,经酶切和测序鉴定后电穿孔法转化入耻垢分枝杆菌,进行单克隆菌落筛选及PCR鉴定。构建的猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗经热诱导后,以SDS-PAGE分析及Western blot分析TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。结果成功扩增出TSOL18目的基因,大小约为393 bp,与预期值相符;经酶切验证,pMV361-TSOL18穿梭质粒构建成功;PCR鉴定猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗构建成功。SDS-PAGE电泳检测重组菌表达的目的蛋白TSOL18,相对分子质量为15×10³与预期相符;Western blot分析该蛋白能被TSOL18兔抗血清识别。结论成功构建了猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,猪带绦虫TSOL18基因在耻垢分枝杆菌中成功表达,表达蛋白具有反应原性,其免疫原性有待进一... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(06)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

图１ＴＳＯＬ１８基因ＰＣＲ扩增ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｏｆＴＳＯＬ１８ＭＤＮＡ标志物１ＴＳＯＬ１８基因ＰＣＲ产物

ＭＤＮＡ标志物１双酶切产物图２重组质粒ｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８的双酶切鉴定ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１ＰｒｏｄｕｃｔｏｆｄｏｕｂｌｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎＦｉｇ．２ＤｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８３猪带绦虫ＴＳＯＬ１８重组耻垢分枝杆菌疫苗的ＰＣＲ鉴定挑取重组菌单菌落于３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡条件下继续扩大培养至Ａ６００值Ｄ约１．０，吸取经高温裂解的上清液作为模板进行ＰＣＲ，结果见图３，扩增片段大小与ＴＳＯＬ１８基因理论值相符。ＭＤＮＡ标志物１～５５个重组菌单菌落的ＰＣＲ产物图３ｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８质粒转化耻垢分枝杆菌菌落ＰＣＲ检测ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１－５ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ５ｓｉｎｇｌｅｃｏｌｏｎｙＦｉｇ．３ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８ｐｌａｓｍｉｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ４猪带绦虫ＴＳＯＬ１８重组耻垢分枝杆菌表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析取鉴定阳性的重组菌单克隆菌落接种于Ｍ７Ｈ９ＡＤＣ液体培养基，经４５℃热诱导４５ｍｉｎ后超声破菌离心，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，结果见图４。Ｍ蛋白标志物１重组菌热诱导前总蛋白２重组菌热诱导后总蛋白３重组菌热诱导后沉淀４重组菌热诱导后上清图４猪带绦虫ＴＳＯＬ１８重组耻垢分枝杆菌ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒ１Ｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｂｅｆｏｒｅｈｅａｔ－ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ２Ｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎａｆｔ

ｒｋｅｒ１ＰｒｏｄｕｃｔｏｆｄｏｕｂｌｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎＦｉｇ．２ＤｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８３猪带绦虫ＴＳＯＬ１８重组耻垢分枝杆菌疫苗的ＰＣＲ鉴定挑取重组菌单菌落于３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡条件下继续扩大培养至Ａ６００值Ｄ约１．０，吸取经高温裂解的上清液作为模板进行ＰＣＲ，结果见图３，扩增片段大小与ＴＳＯＬ１８基因理论值相符。ＭＤＮＡ标志物１～５５个重组菌单菌落的ＰＣＲ产物图３ｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８质粒转化耻垢分枝杆菌菌落ＰＣＲ检测ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１－５ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ５ｓｉｎｇｌｅｃｏｌｏｎｙＦｉｇ．３ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐＭＶ３６１－ＴＳＯＬ１８ｐｌａｓｍｉｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ４猪带绦虫ＴＳＯＬ１８重组耻垢分枝杆菌表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析取鉴定阳性的重组菌单克隆菌落接种于Ｍ７Ｈ９ＡＤＣ液体培养基，经４５℃热诱导４５ｍｉｎ后超声破菌离心，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，结果见图４。Ｍ蛋白标志物１重组菌热诱导前总蛋白２重组菌热诱导后总蛋白３重组菌热诱导后沉淀４重组菌热诱导后上清图４猪带绦虫ＴＳＯＬ１８重组耻垢分枝杆菌ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒ１Ｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｂｅｆｏｒｅｈｅａｔ－ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ２Ｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｈｅａｔ－ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ３Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｈｅａｔ－ｉｎｄｕｃ

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪带绦虫重组质粒pMG36e-TSOL18和pMG36e-SP-TSOL18在乳球菌中的表达[J]. 李想,孙俊超,周必英.  中国病原生物学杂志. 2018(09)
[2]基因工程重组耻垢分枝杆菌研究进展[J]. 李想,周必英.  中国病原生物学杂志. 2018(01)
[3]载体介导的刚地弓形虫SAG疫苗的研制现状[J]. 李文桂,陈雅棠.  中国病原生物学杂志. 2017(02)
[4]猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗的稳定性研究[J]. 江楠,杨凤娇,周必英.  中国病原生物学杂志. 2017(02)
[5]猪带绦虫基因组学及猪囊尾蚴病候选疫苗的研究进展[J]. 马承旭,王宏伟,杨艺萱.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2016(02)
[6]猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其表达[J]. 杨凤娇,周必英.  中国人兽共患病学报. 2015(10)
[7]猪囊尾蚴疫苗的研究进展[J]. 李婷婷,刘阳,苏永超,杜立银.  山东畜牧兽医. 2015(09)
[8]猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18重组蛋白疫苗免疫小鼠诱导的免疫应答[J]. 肖红利,申万文,高健安,石林江,张又心,周必英.  中国病原生物学杂志. 2015(02)
[9]猪带绦虫重组Bb（pGEX-TSO45W-4B-TSOL18）疫苗的构建及鉴定[J]. 周必英,刘美辰,贺莉芳.  中国病原生物学杂志. 2014(04)
[10]猪带绦虫重组抗原研究进展[J]. 周必英.  中国人兽共患病学报. 2014(04)



本文编号：3061596