Hpd基因修饰制备高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型

发布时间：2021-03-04 02:10

　　目的利用CRISPR/Cas9技术敲除巴马小型猪4-羟基苯丙酮酸氧化酶（4-OH phenylpyruvate dioxygenase,4HPPD/HPD）制备高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型。方法分别从质粒pGL3-U6-gRNA-PGK-puromycin和pST1374-NLS-flag-linker-Cas9中通过PCR扩增sgRNA-Hpd和Cas9体外转录用模板,接着体外转录出Cas9 mRNA和sgRNA-Hpd,最后将Cas9 mRNA和sgRNA-Hpd共注射入巴马小型猪受精卵的胞质内,以制备Hpd基因敲除巴马小型猪。结果胞质内共注射后,共移植20枚受精卵至2只代孕母猪。获得子代Hpd基因敲除巴马小型猪共4只。结论本研究成功制备了高酪氨酸血症Ⅲ型巴马小型猪模型,将为研究酪氨酸代谢通路提供更好的模型。 

【文章来源】：中国比较医学杂志. 2019,29(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 载体
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 SgRNA-Hpd和Cas9 mRNA获取
        1.3.2 巴马小型猪同步发情与受精卵获取
        1.3.3 Cas9 mRNA和sgRNA的受精卵胞质内共注射
        1.3.4 胚胎移植及妊娠检测
        1.3.5 基因型鉴定
        1.3.6 蛋白表达水平检测
        1.3.7 血液氨基酸检测
            （1） 样品采集:
            （2） 样品处理方法:
            （3） 数据分析:
        1.3.8 尿液酪氨酸代谢产物检测
            （1） 尿样采集和预处理:
            （2） 样品处理方法:
            （3） 色谱及质谱条件:
2 结果
    2.1 sgRNA设计及Cas9 mRNA和sgRNA制备
    2.2 受精卵胞质内共注射Cas9 mRNA和sgRNA建立HPD基因修饰巴马小型猪
    2.3 基因型鉴定
    2.4 HPD蛋白表达
    2.5 血液酪氨酸水平
    2.6 尿液氨基酸代谢产物含量
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]新生儿苯丙酮尿症两种实验室筛查方法的质量评价[J]. 田国力,许洪平,朱伟明,管翌华,王燕敏.  检验医学. 2007(02)



本文编号：3062373