下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制
发布时间：2021-03-20 06:50
目的探讨TLR4对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。方法将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组（未处理）、LPS组（给予50μg/ml LPS处理）、LPS+siNC组（转染siRNA-NC后给予50μg/ml LPS处理）和LPS+siTLR4组（分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50μg/ml LPS处理）,采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-αmRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。结果 LPS组与LPS+siTLR4-2组TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表达（0.38±0.03,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t=1...
【文章来源】：中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2019,9(03)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
WesternBlot检测TLR4蛋白的表达结果
·170·中华细胞与干细胞杂志(电子版)2019年6月第9卷第3期ChinJCellStemCell(ElectronicEdition),June2019,Vol.9,No.3注：a图为对照组，b图为LPS组，c图为LPS+siNC组，d图为LPS+siTLR4组图2流式细胞仪检测细胞凋亡蛋白IκBα（t1=10.493，t2=11.418，t3=7.407，P均<0.01）表达水平降低，而NF-κBp65（t1=10.540，t2=11.418，t3=4.977，P均<0.01）蛋白的表达升高（P均<0.05）；与LPS组比较，LPS+siNC组中IκBα（t=0.926，P=0.382）和NF-κBp65（t=0.878，P=0.405）蛋白的表达差异无统计学意义（P均>0.05），但LPS+siTLR4组中IκBα（t=3.086，P=0.015）蛋白表达升高，而NF-κBp65（t=5.563，P=0.001）蛋白表达降低（P均<0.05）。（图4，表5）图3WesternBlot检测Bcl-2、Bax和CleavedCaspase-3蛋白的表达图4WesternBlot检测IκBα和NF-κBp65蛋白的表达表4各组16HBE细胞中凋亡相关蛋白的表达水平（n=3，x±s）分组Bcl-2BaxCleavedCaspase-3对照组0.69±0.060.11±0.020.13±0.02LPS组0.28±0.03a0.48±0.05a0.75±0.06aLPS+siNC组0.25±0.03a0.52±0.05a0.77±0.05aLPS+siTLR4组0.40±0.03ab0.33±0.02ab0.38±0.03abF值76.76271.310154.851P值<0.01<0.01<0.01注：与对照组相比，aP<0.05；与LPS组相比，b
NF-κBp65（t1=10.540，t2=11.418，t3=4.977，P均<0.01）蛋白的表达升高（P均<0.05）；与LPS组比较，LPS+siNC组中IκBα（t=0.926，P=0.382）和NF-κBp65（t=0.878，P=0.405）蛋白的表达差异无统计学意义（P均>0.05），但LPS+siTLR4组中IκBα（t=3.086，P=0.015）蛋白表达升高，而NF-κBp65（t=5.563，P=0.001）蛋白表达降低（P均<0.05）。（图4，表5）图3WesternBlot检测Bcl-2、Bax和CleavedCaspase-3蛋白的表达图4WesternBlot检测IκBα和NF-κBp65蛋白的表达表4各组16HBE细胞中凋亡相关蛋白的表达水平（n=3，x±s）分组Bcl-2BaxCleavedCaspase-3对照组0.69±0.060.11±0.020.13±0.02LPS组0.28±0.03a0.48±0.05a0.75±0.06aLPS+siNC组0.25±0.03a0.52±0.05a0.77±0.05aLPS+siTLR4组0.40±0.03ab0.33±0.02ab0.38±0.03abF值76.76271.310154.851P值<0.01<0.01<0.01注：与对照组相比，aP<0.05；与LPS组相比，bP<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶多酚对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用及其机制[J]. 刘翠翠,赵龙,石晓岚,王宁,马彩玲. 中国儿童保健杂志. 2017(10)
[2]TLR4在LPS诱导的大鼠肝内胆管组织损伤中的作用及机制[J]. 闫鹏展,赵礼金,涂奎,顾进,王芳. 山东医药. 2017(24)
[3]TLR4在脂多糖诱导肾小管上皮细胞MAPK信号通路中的作用及其机制[J]. 吴乙偲,郑世翔,陈星华,颜奇,杨红霞,丁国华. 武汉大学学报(医学版). 2016(05)
本文编号：3090563
【文章来源】：中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2019,9(03)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
WesternBlot检测TLR4蛋白的表达结果
·170·中华细胞与干细胞杂志(电子版)2019年6月第9卷第3期ChinJCellStemCell(ElectronicEdition),June2019,Vol.9,No.3注：a图为对照组，b图为LPS组，c图为LPS+siNC组，d图为LPS+siTLR4组图2流式细胞仪检测细胞凋亡蛋白IκBα（t1=10.493，t2=11.418，t3=7.407，P均<0.01）表达水平降低，而NF-κBp65（t1=10.540，t2=11.418，t3=4.977，P均<0.01）蛋白的表达升高（P均<0.05）；与LPS组比较，LPS+siNC组中IκBα（t=0.926，P=0.382）和NF-κBp65（t=0.878，P=0.405）蛋白的表达差异无统计学意义（P均>0.05），但LPS+siTLR4组中IκBα（t=3.086，P=0.015）蛋白表达升高，而NF-κBp65（t=5.563，P=0.001）蛋白表达降低（P均<0.05）。（图4，表5）图3WesternBlot检测Bcl-2、Bax和CleavedCaspase-3蛋白的表达图4WesternBlot检测IκBα和NF-κBp65蛋白的表达表4各组16HBE细胞中凋亡相关蛋白的表达水平（n=3，x±s）分组Bcl-2BaxCleavedCaspase-3对照组0.69±0.060.11±0.020.13±0.02LPS组0.28±0.03a0.48±0.05a0.75±0.06aLPS+siNC组0.25±0.03a0.52±0.05a0.77±0.05aLPS+siTLR4组0.40±0.03ab0.33±0.02ab0.38±0.03abF值76.76271.310154.851P值<0.01<0.01<0.01注：与对照组相比，aP<0.05；与LPS组相比，b
NF-κBp65（t1=10.540，t2=11.418，t3=4.977，P均<0.01）蛋白的表达升高（P均<0.05）；与LPS组比较，LPS+siNC组中IκBα（t=0.926，P=0.382）和NF-κBp65（t=0.878，P=0.405）蛋白的表达差异无统计学意义（P均>0.05），但LPS+siTLR4组中IκBα（t=3.086，P=0.015）蛋白表达升高，而NF-κBp65（t=5.563，P=0.001）蛋白表达降低（P均<0.05）。（图4，表5）图3WesternBlot检测Bcl-2、Bax和CleavedCaspase-3蛋白的表达图4WesternBlot检测IκBα和NF-κBp65蛋白的表达表4各组16HBE细胞中凋亡相关蛋白的表达水平（n=3，x±s）分组Bcl-2BaxCleavedCaspase-3对照组0.69±0.060.11±0.020.13±0.02LPS组0.28±0.03a0.48±0.05a0.75±0.06aLPS+siNC组0.25±0.03a0.52±0.05a0.77±0.05aLPS+siTLR4组0.40±0.03ab0.33±0.02ab0.38±0.03abF值76.76271.310154.851P值<0.01<0.01<0.01注：与对照组相比，aP<0.05；与LPS组相比，bP<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶多酚对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用及其机制[J]. 刘翠翠,赵龙,石晓岚,王宁,马彩玲. 中国儿童保健杂志. 2017(10)
[2]TLR4在LPS诱导的大鼠肝内胆管组织损伤中的作用及机制[J]. 闫鹏展,赵礼金,涂奎,顾进,王芳. 山东医药. 2017(24)
[3]TLR4在脂多糖诱导肾小管上皮细胞MAPK信号通路中的作用及其机制[J]. 吴乙偲,郑世翔,陈星华,颜奇,杨红霞,丁国华. 武汉大学学报(医学版). 2016(05)
本文编号：3090563
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