构建TRAF6基因3’非编码区荧光素酶报告质粒验证及与潜在靶基因TRAF6的靶向关系

发布时间：2021-04-14 18:08

　　背景:前期研究发现miR-146-5p在染氟成骨细胞凋亡时表达上调。目的:构建肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）基因3’非编码区（3’UTR）荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告基因验证miR-146-5p与其潜在靶基因TRAF6的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测mi R-146-5p与TRAF6基因的结合位点。采用PCR技术扩增TRAF6基因3’UTR片段,并克隆至p Yr-MirTarget载体,构建野生型重组双荧光素酶报告质粒。实验分6组:①6a-5p-核苷类似物+TRAF6野生型3’-UTR共转组;②无核苷类似物对照+TRAF6野生型3’UTR共转组（对照组）;③miR-146a-5p-抑制剂+TRAF6野生型;④TRAF6野生型3’-UTR转染组;⑤p Yr-MirTarget空质粒转染组;⑥正常细胞组。分别将重组荧光素酶报告质粒与miR-146-5p和核苷类似物共转染Saos-2,同时设置无核苷类似物对照、miR-146-5p抑制剂阴性对照和空载p Yr-MirTarget-W3’UTR、TRAF... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2019,23(27)北大核心

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文章快速阅读:
文题释义:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
    1.4 实验方法
        1.4.1 构建荧光素酶报告基因载体
        1.4.2 miR-146a-5p与TRAF6-Luc共转染
        1.4.3 双荧光素酶活性检测裂解细胞
        1.4.4 免疫印迹实验检测TRAF6蛋白表达
    1.5 主要观察指标
    1.6 统计学分析
2 结果Results
    2.1 荧光素酶报告基因载体构建结果
    2.2 载体转染后荧光素酶活性
    2.3 免疫印迹检测各组细胞TRAF6蛋白表达
3 讨论Discussion


【参考文献】：
期刊论文
[1]氟化钠诱导人成骨细胞凋亡相关microRNA差异表达及分析[J]. 邓强,张亚楼,周杨俊杰,马创,盛伟斌.  中国组织工程研究. 2018(08)
[2]氟骨症临床与影像学诊断[J]. 马国福.  影像研究与医学应用. 2017(12)
[3]mTOR自噬通路在染氟大鼠软骨关节损伤中的作用[J]. 陈荣,于燕妮,徐淋,邓超男.  中国地方病防治杂志. 2017(01)
[4]Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证[J]. 王珊,李晓霞,周杰,王宝利.  天津医药. 2016(09)
[5]地方性氟骨症治疗的研究进展[J]. 史睿亭,李维维,徐泽华.  生物技术世界. 2015(05)



本文编号：3137773