转录因子FOXO1调控人巨细胞病毒复制的机制研究

发布时间：2017-04-19 22:37

  本文关键词：转录因子FOXO1调控人巨细胞病毒复制的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：FOXO转录因子家族在细胞内参与并调控众多的下游基因的表达,它们维持并影响了众多的细胞生理进程,这些细胞进程包括：细胞增殖、细胞死亡、代谢以及应激反应等。此外,一些研究结果表明,FOXO转录因子家族在部分病毒的生长过程中也起到非常重要的作用,这些病毒包括gamma疱疹病毒、丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)等。在我们的研究中,我们发现一种对人类健康影响很大的p疱疹病毒——人巨细胞病毒(HCMV),它在感染人成纤维细胞MRC5的过程中,病毒会大量地诱导宿主细胞表达FOXO1蛋白。通过免疫荧光技术,我们观察到FOXO1蛋白和病毒复制中心(virus Replication Compartment, vRC)的标记蛋白pUL44在细胞内共定位,这表明人巨细胞病毒不仅上调了FOXO1蛋白表达,并且还将它们募集到细胞核内的病毒复制中心。为了进一步研究FOXO1蛋白对于人巨细胞病毒感染的重要性,我们利用RNA干扰技术(RNAi)下调病毒感染后细胞内FOXO1蛋白的表达水平,结果发现,缺失FOXO1蛋白会非常显著地抑制人巨细胞病毒的复制,并且子代病毒的复制减少了60多倍。为了进一步从机理上解释FOXO1蛋白对于人巨细胞病毒感染为何如此重要,我们检测了病毒感染过程中病毒立早期、早期以及晚期蛋白的表达情况,结果发现,FOXO1蛋白缺失会严重抑制人巨细胞病毒晚期蛋白(Late)的表达,而且FOXO1蛋白主要是在转录水平对这些病毒晚期蛋白的表达进行调控。除此之外,我们还发现FOXO1蛋白缺失会对病毒的基因组DNA复制产生大约3倍左右的抑制。有趣的是,SOD2和Catalase作为FOXO1直接调控的下游基因,它们的蛋白表达不但没有随FOXO1蛋白的上调而上调,反而受到了显著性的抑制。并且,在细胞里过表达SOD2蛋白或Catalase蛋白会明显抑制人巨细胞病毒的复制。我们的研究结果阐明了FOXO1蛋白在人巨细胞病毒感染过程中的重要性,暗示了它可能发展成为一个潜在的药物作用靶点。
【关键词】：FOXO1 人巨细胞病毒 病毒复制
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 绪论11-26
• 第一节 人巨细胞病毒概述11-20
• 1.1.1 人巨细胞病毒结构特征11-13
• 1.1.2 人巨细胞病毒基因组结构特征13-16
• 1.1.3 人巨细胞病毒感染过程16-18
• 1.1.4 人巨细胞病毒和宿主细胞相互作用研究18-19
• 1.1.5 人巨细胞病毒的危害19-20
• 第二节 FOXO转录因子亚家族概述20-24
• 1.2.1 FOXO转录因子亚家族对细胞基因表达的调控20-21
• 1.2.2 翻译后修饰对FOXO蛋白活性的影响21-23
• 1.2.3 FOXO调控下游基因转录的分子机制研究进展23-24
• 第三节 FOXO对病毒复制和致病机制的研究进展24-26
• 第二章 转录因子FOXO1调控病毒生长的机制研究26-63
• 第一节 实验材料和方法26-46
• 2.1.1 实验材料26-29
• 2.1.2 实验方法29-46
• 第二节 实验结果分析46-60
• 2.2.1 FOXO转录因子家族在人巨细胞病毒感染过程中的表达情况46-51
• 2.2.2 FOXO1蛋白缺失对人巨细胞病毒生长和子代病毒复制的影响51-57
• 2.2.3 人巨细胞病毒感染改变转录因子FOXO1对下游基因SOD2和Catalase的调控57-60
• 第三节 讨论60-63
• 第三章 结论和和展望63-64
• 第一节 结论63
• 第二节 展望和不足63-64
• 附录64-67
• 参考文献67-74
• 致谢74-75

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本文编号：317292