重组人免疫球蛋白D-Fc片段蛋白的构建

发布时间：2021-05-22 05:59

　　目的构建重组人免疫球蛋白D-Fc（IgD-Fc）片段蛋白,检测IgD受体（IgDR）在健康人CD4⁺T细胞和T淋巴瘤细胞株Jurkat、MOLT-4上的表达情况,检测IgD-Fc与IgD竞争结合CD4+T细胞表面IgDR的能力。方法采用PCR法得到人IgD-Fc目的基因,经原核蛋白表达和层析纯化,制备出重组人IgD-Fc片段蛋白。流式细胞术检测IgDR在健康人CD4+T细胞和T淋巴瘤细胞株Jurkat、MOLT-4上的表达情况,以及IgD、重组人IgD-Fc片段蛋白与CD4+T细胞表面IgDR的竞争结合情况。结果成功构建含IgD-Fc基因片段的原核表达载体p ET28a（+）/IgD-Fc,得到重组人IgD-Fc片段蛋白。CD4+T细胞及T淋巴瘤细胞株表面IgDR与IgD亲和力相近,重组人IgD-Fc片段蛋白可与IgD竞争性结合IgDR。结论重组人IgD-Fc片段蛋白工艺成熟稳定,可与IgD竞争性结合IgDR,可能成为针对IgD水平升高的自身免疫性疾病的新型治疗药物。 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2019,54(04)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 样本
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 方法
        1.3.1 pET28a (+) /IgD-Fc表达载体的构建
            1.3.1.1 健康人外周血cDNA获取
            1.3.1.2 IgD-Fc基因片段的扩增及重组表达载体的构建
        1.3.2 重组人IgD-Fc片段蛋白的诱导表达
        1.3.3 重组人IgD-Fc片段蛋白的亲和层析、分子筛纯化及产物测定
        1.3.4 CD4+T细胞的分离、T淋巴瘤细胞株的培养
        1.3.5 外周血CD4+T细胞和T淋巴瘤细胞株表面IgDR的表达
        1.3.6 IgD与CD4+T细胞和T淋巴瘤细胞株表面IgDR的亲和力实验
        1.3.7 CD4+T细胞的IgDR竞争结合实验
2 结果
    2.1 重组人IgD-Fc片段蛋白的表达、纯化
        2.1.1 pET28a (+) /IgD-Fc原核表达载体构建
        2.1.2 重组人IgD-Fc片段蛋白的表达
        2.1.3 重组人IgD-Fc片段蛋白的纯化
    2.2 CD4+T细胞和T淋巴瘤细胞株表面IgDR的表达
    2.3 IgD与CD4+T细胞及T淋巴瘤细胞株表面IgDR的亲和力
    2.4 重组人IgD-Fc片段蛋白、IgD与CD4+T细胞表面IgDR的竞争结合实验
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]IgD对人外周血Th1/Th2、Th17/Treg亚群及核转录因子的影响[J]. 董小洁,吴育晶,张静,陈文生,黄琼,魏伟.  中国临床药理学与治疗学. 2018(05)
[2]流式细胞术检测IgD与IgD受体结合实验方法的建立[J]. 陈恒石,吴育晶,黄琼,陈文生,董进,魏伟.  安徽医科大学学报. 2016(08)
[3]IgD在自身免疫病中作用的研究进展[J]. 陈文生,黄琼,吴育晶,魏伟.  中国药理学通报. 2014(03)



本文编号：3201115