低氧对淋巴细胞增殖活化和巨噬细胞前炎症因子分泌的影响及机制

发布时间：2021-05-23 01:03

　　目的：探讨低氧时淋巴细胞[Ca²⁺]i变化与淋巴细胞增殖活化的关系以及MφNF-κB信号转导通路的激活和对前炎症因子TNF-α和IL-6的调控作用。以了解低氧对免疫细胞功能的影响及机制，阐明低氧性炎症反应的机理。方法：建立淋巴细胞和Mφ低氧培养模型；ELISA法检测培养液中IL-2、TNF-α和IL-6的分泌水平；MTT法测定淋巴细胞转化率；RT-PCR法观察TNF-α、IL-6和p65转录水平；荧光分光光度法测定淋巴细胞[Ca²⁺]i变化和Mφ内ROS水平；Western blotting法检测Mφ胞浆内IκBα的磷酸化水平和细胞核内NF-κB的激活量。结果：①急性低氧后淋巴细胞[Ca²⁺]i下降，同时IgG、IL-2分泌量和淋巴细胞增殖率也明显下降；低氧预处理后再进行急性低氧，发现上述指标都恢复到与对照组相近的水平。②低氧后Mφ前炎症因子TNF-α和IL-6分泌和转录水平增加，同时IκBα酪氨酸磷酸化水平、细胞核内NF-κB激活量以及NF-κB P65转录水平增高。③抗氧化剂NAC可使IκBα酪氨酸磷酸化水平下降，酪... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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英文摘要
前言
第一部分 低氧及低氧预处理后淋巴细胞[Ca~(2+)]i变化与淋巴细胞增殖活化的关系
    一、 实验材料
        1 主要仪器
        2 主要试剂
        3 实验取材
    二、 实验方法
        1 淋巴细胞分离培养
        2 实验分组
        3 Fura-2／AM荧光分光光度法检测[Ca~(2+)]i
        4 ELISA法检测IgG
        5 ELISA法检测IL-2
        6 MTT法检测淋巴细胞增殖率
        7 统计分析
    三、 实验结果
        1 细胞内Ca~(2+)浓度检测结果
        2 IgG分泌量检测结果
        3 IL-2分泌量检测结果
        4 淋巴细胞增殖率检测结果
    四、 讨论
    小节
第二部分 低氧对Mφ前炎症因子分泌的影响
    一、 实验材料
        1 主要仪器
        2 主要试剂
        3 实验取材
    二、 实验方法
        1 Mφ分离培养
        2 非特异性酯酶染色法鉴定Mφ
        3 实验分组
        4 ELISA法检测TNF-α
        5 ELISA法检测IL-6
        6 Mφ总RNA分离与提取
        7 RNA浓度分析和纯度鉴定
        8 甲醛变性电泳鉴定RNA完整性
        9 RT-PCR检测TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表达水平
        10 统计分析
    三、 实验结果
        1 Mφ培养
        2 Mφ鉴定结果
        3 不同氧浓度条件下TNF-α和IL-6的分泌量
        4 不同低氧时间条件下TNF-α和IL-6的分泌量
        5 RNA纯度鉴定的结果
        6 RNA完整性鉴定的结果
        7 不同氧浓度条件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表达量
        8 不同低氧时间条件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表达量
    四、 讨论
    小节
第三部分 低氧后Mφ前炎症因子分泌增加的机制-NF-κB信号转导通路的激活
    一、 实验材料
        1 主要仪器
        2 主要试剂
        3 实验取材
    二、 实验方法
        1 Mφ分离培养
        2 实验分组及检测指标
        3 荧光分光光度法检测细胞内ROS水平
        4 胞浆蛋白提取方法
        5 细胞核内蛋白提取方法
        6 考马斯亮蓝蛋白定量法
        7 Western blotting法检测IκBα酪氨酸磷酸化水平
        8 Western blotting法检测细胞核内NF-κB激活量
        9 RT-PCR法检测NF-κBp56的转录水平
        10 统计分析
    三、 实验结果
        1 细胞内ROS水平检测结果
        2 IκBα酪氨酸磷酸化水平检测结果
        3 细胞核内NF-κB激活量
        4 抗氧化剂对低氧时IκBα磷酸化水平的影响
        5 酪氨酸蛋白激酶抑制剂对低氧时Mφ核内NF-κB激活量的影响
        6 NF-κBp65转录水平检测结果
    四、 讨论
    小节
结论
参考文献
附录
致谢
文献综述
硕士期间发表和待发表的文章及参加的学术会议


【参考文献】：
期刊论文
[1]全身炎症反应综合征患者致炎因子与抗炎因子的变化及相关性研究[J]. 许国根,陈雯,张万光,陈颖,缪群.  中国急救医学. 2002(06)
[2]核因子-κB反义寡核苷酸对系膜细胞炎症因子基因表达的影响[J]. 丁桂霞,陈荣华,张爱华,吴元俊,潘晓勤.  肾脏病与透析肾移植杂志. 2002(02)
[3]自主神经系统参与低氧下的免疫调节作用[J]. 白海波,杜继曾,郑筱祥.  中国应用生理学杂志. 2001(03)
[4]核因子κB（Nuclear Factor κB,NF-κB）:一个新的治疗目标[J]. 冷启新,hotmail.com,刘执玉,李瑞祥.  解剖科学进展. 1999(04)
[5]健康青年进驻高原血清TNF-α和IL-6的变化[J]. 崔建华,张西洲,何富文,王正理,周新梅,哈振德,赵升阳,张素萍.  西北国防医学杂志. 1999(03)
[6]7000m急性低压缺氧对T、B淋巴细胞增殖反应影响的实验研究[J]. 高梅,王典瑞,徐斌,张晓秀,赵行宇.  航空军医. 1998(03)
[7]促肾上腺皮质激素释放因子介导低氧应激抑制淋巴细胞转化的实验研究[J]. 白海波,杜继曾.  中国应用生理学杂志. 1995(03)



本文编号：3201983