两株人源性抗HFRSV单抗可变区基因的克

发布时间：2021-06-11 11:19

　　近二十年来，单克隆抗体已在医学基础研究和临床疾病的诊断等方面得到了广泛应用，但是由于使用的单抗多来源于啮齿类，应用于人体可导致免疫排斥反应，从而限制了单抗在疾病治疗中的应用。临床应用价值高的人源性单抗在制备过程中又存在抗体产量低、不稳定、且多为IgM型等困难，至今尚无有效的解决方法。近十年来基因工程技术的发展给人们带来了希望。利用基因重组技术可对人单抗进行改造，抗体可变区基因克隆后可使其获得永生化（immortalize），，并可在真核细胞或原核细胞中表达，得到与亲本抗体有同样抗原结合活性的基因工程抗体。 人-人杂交瘤细胞系87-2,可分泌抗肾综合症出血热病毒IgM（λ）型人单抗。本文从该杂交瘤细胞株提取细胞总RNA,以oligo-d（T）为引物反转录合成cDNA第一链。使用根据人抗体重链和λ轻链可变区5’端和3’端保守序列设计而人工合成的两对引物，以cDNA链为模板进行PCR扩增反应，将重、轻链可变区基因扩增产物插入M13噬菌体，经酶切鉴定，筛选到含抗体可变区基因的重组体，据此制备单链模板，用双脱氧链终止法，测出其核苷酸序列，所得DNA序列经计算机分析，轻、重链可变区基因全长分别为 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

抗独特型抗体种类，

(三)质粒pUC1:92686Pb，含有一个54bP的多克隆位点接头，p一半乳糖昔酶(lacZ)基因插人失活，氨节青霉素(Amp)抗性(图1一l一)l乃叩~netof及。hc喇珍笋肠e石burht撇lit口)乙知jv已六.织刀如第4‘页

’现，细胞成活率高达95%以上，同时采用异硫氰酸肌快速一步法，提取细胞RNA，产物经稀释100倍后经紫外测定(图1一1一4)OD260为1.3794，OD280为0.8077，ODZ印心D28o为1.72.D印artl，;entofBiohcneli‘t尽、TheFouhrt九IIIiOt八产Unive厂女仅xi，na第55页

【参考文献】：
期刊论文
[1]一株具有 HFRSV 抗原内影像的抗独特型人单克隆抗体的鉴定[J]. 米力,金伯泉,崔远昌,高磊,徐志凯,梁喆,李海凤.  中国免疫学杂志. 1992(05)
[2]EB病毒转化的人外周血淋巴细胞与SHM—D33细胞系融合制备人单克隆抗体[J]. 崔运昌,朱勇,高磊,孙忱,米力,董帮权.  中国免疫学杂志. 1989(03)



本文编号：3224436