幽门螺杆菌vacA基因毒性片段与hpaA基因的原核表达及初步应用

发布时间：2024-11-02 00:48

　　目的:通过基因工程技术获得重组幽门螺杆菌VacA毒性片段蛋白,为制备Hp感染的诊断试剂和研制疫苗提供有效抗原。以重组蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体间接ELISA法，为制备检测Hp毒株感染的试剂盒奠定基础。 方法：通过BLAST比较国内Hp代表株的vacA基因毒性亚单位，找出高度同源性片段，按标准株AF050320 vacA基因序列设计引物，利用PCR技术从Hp基因组中扩增vacA基因毒性片段（v），插入原核表达载体pQE30上，转化表达受体菌DH5α,SDS-PAGE分析表达情况，Western blot检测其抗原性。Ni-NTA2+树脂纯化后，用重组蛋白免疫兔，Helico Blot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。并以纯化的重组蛋白为抗原，建立检测血清VacA抗体间接ELISA法，以Helico Blot试剂盒为标准，确定该方法的特异性与敏感性。 结果： 1.重组表达质粒pQE30-V构建成功,序列分析所得序列完整，与文献报道的各中国菌株相比有高度同源性，而与标准株AF361700比较有1 .5%的bp及一个氨基酸发生变异；2....

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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第一部分 幽门螺杆菌vacA基因毒性片段的原核表达及初步应用
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
第二部分 幽门螺杆菌vacA毒性片段与hpaA融合基因的原核表达
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
文献综述
致谢
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本文编号：4008758