人B7-H4受体及其抗体的研究

发布时间：2017-04-23 22:07

  本文关键词：人B7-H4受体及其抗体的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：B7-H4是一种负性共刺激分子,是近年来发现的B7家族的新成员之一。它的作用是通过抑制T细胞的增殖、活化和细胞因子的分泌来调节适应性免疫应答。人类的B7-H4属于Ⅰ型跨膜蛋白,与其他B7家族成员相比,其胞外部分有20-30%的氨基酸同源性。人类的B7-H4分子定位在人染色体1p11.1,由6个外显子和5个内含子组成,其m RNA在淋巴和非淋巴组织中呈广泛性表达,但是由于受到转录后水平的严格调控,B7-H4蛋白仅在正常组织中呈现微弱的表达。最近的研究表明,B7-H4分子在正常人新鲜分离的T、B淋巴细胞,树突状细胞(DCs)和单核细胞表面均不表达,但可以被体外活化刺激因子诱导表达,有报道称B7-H4分子在乳腺癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌等多种恶性肿瘤及肿瘤相关巨噬细胞中呈现异常高表达。这些证据都表明,B7-H4的表达在肿瘤微环境中对肿瘤细胞逃避机体的免疫监视具有重要作用。迄今为止,与B7-H4相互作用的受体仍未被发现,但是关于其受体的研究是目前免疫学研究的热点之一,其受体的发现将会帮助我们更进一步的了解B7-H4与其受体相互作用的机制,为临床应用提供一定的理论依据。本科室利用标记有FITC的B7-H4-h Fc融合蛋白进行流式细胞术检测发现,在来源于扁桃体的部分淋巴细胞上组成性的表达B7-H4受体,另外在活化T细胞和肺癌组织、肺癌转移淋巴结来源的T细胞上也表达B7-H4受体。本研究旨在通过B7-H4-h Fc融合蛋白制备亲和层析柱,从扁桃体细胞分离纯化B7-H4受体,并对该受体蛋白进行初步的鉴定,随后利用所获得的该受体蛋白对本科室的两株疑似抗B7-H4受体的单抗进行鉴定。【目的】获得并检测B7-H4的受体,利用B7-H4的受体检测本科室所制备的疑似抗B7-H4受体的单抗。【方法】通过B7-H4-h Fc融合蛋白装柱制备亲和层析柱,从扁桃体细胞分离获得B7-H4受体蛋白,观察SDS-PAGE电泳目的条带位置以及与羊抗人-HRP和羊抗鼠-HRP的反应。对所得的抗B7-H4受体的疑似单抗及B7-H4-h Fc融合蛋白进行生物素的标记,用酶联免疫方法ELISA对疑似抗B7-H4受体的单抗进行检测。【结果】成功制备结合B7-H4-h Fc的亲和层析柱,分离纯化的B7-H4受体蛋白进行SDS-PAGE并染色后在170k D上方有条带,ELISA检测结果显示该B7-H4受体与羊抗人-HRP、羊抗鼠-HRP有反应。以该受体蛋白进行包板,用ELISA方法鉴定,显示单抗10A10与B7-H4受体有阳性反应。【结论】成功分离纯化获得B7-H4受体,并利用该受体对疑似抗B7-H4受体的单抗进行了初步鉴定,成功鉴定出一株抗B7-H4受体的抗体,为进一步研究B7-H4受体的生物学功能提供了有效的工具。
【关键词】：协同刺激分子 B7-H4 融合蛋白 B7-H4受体 单克隆抗体 ELISA
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-24
• 参考文献20-24
• 引言24-25
• 1 实验试剂与材料25-27
• 2 实验方法27-34
• 3 结果34-44
• 4 讨论44-46
• 总结与展望46-47
• 参考文献47-49
• 研究生期间完成的论文49-50
• 缩略词表50-52
• 致谢52-53

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 朱森良;孙晓青;;siRNA靶向沉默B7-H4基因对人前列腺癌DU145细胞增值和凋亡的影响[J];河南外科学杂志;2012年06期

2 张羽;陈曾燕;;B7-H4在上皮性卵巢癌中的表达及意义[J];临床肿瘤学杂志;2013年12期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 周建波;VTCN1基因在膀胱癌发生发展中作用及机制研究[D];武汉大学;2014年

2 杨文兵;VTCN1基因在神经胶质瘤发生发展中作用机制的研究[D];武汉大学;2014年

  本文关键词：人B7-H4受体及其抗体的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：323094