胸腺素alpha-1基因的克

发布时间：2021-06-20 13:53

　　目的：人工合成胸腺素α1（thymosin alphal，Tα1）三串体（Tα1③）的串联基因及Ta1和Ref（一种P1噬菌体蛋白）的重组基因，克隆至原核表达载体，构建高表达菌株，利用基因工程方法实现Tα1三串体及Ref-Tα1重组蛋白的高效表达，并进行目的蛋白的纯化及生物学活性的鉴定。方法：使用大肠杆菌偏爱密码子，人工合成Tαl③和Ref-Tα1基因，并分别克隆在表达载体pET-22b（+）和pBV220中，转化大肠杆菌BL21（DE3）和DH5α，通过加入IPTG及控制温度诱导表达，表达的目的蛋白分别经DEAE-Sepharose FF阴离子柱及CM-Sepharose FF阳离子柱进行纯化，Western-blot进行鉴定，体外淋巴细胞增殖试验进行生物学活性测定。结果：PCR分别扩增出280bp和360bp的DNA片段，将其克隆入pET-22b（+）和pBV220中，酶切和测序鉴定正确。用IPTG及温控分别诱导重组质粒转化的大肠杆菌BL21（DE3）和DH5α，各得到大小约10KD和15KD的串联及重组蛋白，合成的蛋白以可溶性形式存在，培养的细菌经收集、裂解后，合成的目的蛋白释放... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SDS一PAGE分析Ref-Tal在大肠杆菌中的表达.

重组蛋白Ref-Tal免疫印迹分析

Tal③基因的PCR鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组胸腺素α1的表达、纯化和生物学活性[J]. 苗红,郭葆玉,张冉,张莉.  中国生物化学与分子生物学报. 2003(05)
[2]拉米夫定联合胸腺肽α1治疗慢性乙型肝炎的疗效观察[J]. 吴福全,黄绍坤,俞洪林.  中华肝脏病杂志. 2002(03)
[3]重组胸腺素α1的克隆、表达与纯化[J]. 薛晓畅,颜真,石继红,韩苇,张英起.  第四军医大学学报. 2001(03)
[4]重组胸腺素α1的纯化及活性[J]. 石继红,张英起,赵宁,赵永同,颜真,韩苇.  生物工程学报. 2000(06)



本文编号：3239321