寨卡病毒E蛋白第三结构域的可溶性表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2021-06-20 13:40

　　目的原核表达并纯化寨卡病毒（Zika virus）E蛋白第三结构域（ZK-EⅢ）重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增ZK-E Ⅲ序列,经双酶切后将其插入原核表达载体p ET-32a（+）中,构建重组表达质粒pET-ZKE Ⅲ,转化至大肠埃希菌（E. coli）Rosetta2（DE3）,经IPTG诱导,表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备ZK-E Ⅲ多克隆抗血清,进行Western blot鉴定后,ELISA法检测该抗血清效价。结果经PCR及测序鉴定证明原核表达质粒pET-ZKE Ⅲ构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约31 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的60%;用纯化的重组蛋白免疫家兔后,获得的血清特异性良好,血清效价为1∶51 200。结论 ZKE Ⅲ蛋白在E. coli中以可溶性形式表达,制备的抗血清特异性好,效价高,具有用于寨卡病毒诊断和进行重组亚单位疫苗开发的潜力。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(06)CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、质粒及细胞
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 实验动物
    1.4 原核表达质粒的构建
    1.5 目的蛋白诱导表达条件的优化及可溶性分析
    1.6 目的蛋白的纯化
    1.7 多克隆抗体的制备及鉴定
        1.7.1 多克隆抗体的制备
        1.7.2 Western blot鉴定
        1.7.3 抗血清效价的检测
2 结果
    2.1 原核表达质粒的鉴定
    2.2 表达产物的鉴定
    2.3 纯化产物的鉴定
    2.4 多克隆抗体的鉴定
    2.5 兔抗血清的效价
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[5]6种虫媒病毒蛋白芯片检测方法的建立[J]. 林方,康晓平,李裕昌,朱晓磊,范丽,魏婧靖,杨银辉,祝庆余.  中华微生物学和免疫学杂志. 2011 (11)



本文编号：3239302