miR-20调控人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞的定向分化

发布时间：2021-06-21 15:55

　　背景:研究发现miR-20在促进骨髓间充质干细胞以及炎症牙周膜干细胞的成骨分化中具有重要意义,但其在牙髓干细胞向神经元细胞分化中的调节功能尚未完全阐明。目的:探讨miR-20调控骨形态发生蛋白信号通路诱导人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞定向分化的机制。方法:从人脱落乳牙中分离纯化乳牙牙髓干细胞并进行神经诱导分化,观察诱导分化期间细胞形态变化,检测Nestin、NSE、miR-20、BMP2的表达。将乳牙牙髓干细胞分为如下5组:阴性对照组（转染阴性对照序列）、miR-20 mimic组（转染mi R-20模拟物48 h）、mi R-20 inhibitor组（转染miR-20抑制物48 h）、通路抑制剂组（骨形态发生蛋白通路抑制剂处理细胞10 d）、联合组（转染mi R-20模拟物并且在转染后24 h在培养基中添加通路抑制剂处理细胞10 d）。各组乳牙牙髓干细胞在神经诱导分化第12天,采用Real-time PCR和Western blot检测BMP2、BMPR2、Nestin和NSE的m RNA和蛋白水平,免疫荧光染色观察Ⅲβ-tubulin的表达,高尔基染色检测神经元细胞树突棘数目。结... 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2019,23(21)北大核心

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【部分图文】：

人乳牙牙髓干细Figure2miR-20andstemcellsfromhuman0d3d6d9d12dGAPDH

7):1662-1676.[26]JinJ,TilveS,HuangZ,etal.Effectofchondroitinsulfateproteoglycansonneuronalcelladhesion,spreadingandneuritegrowthinculture.NeuralRegenRes.2018;13(2):289-297.[27]XuL,LongJ,ShiC,etal.Effectofleukocyteinhibitoryfactoronneurondifferentiationfromhumaninducedpluripotentstemcell-derivedneuralprecursorcells.IntJMolMed.2018;41(4):2037-2049.图注：图中A为Ⅲβ-tubulin免疫荧光图(×200)；B为Ⅲβ-tubulin荧光相对强度。与阴性对照组相比，aP<0.05。图4各组人乳牙牙髓干细胞在诱导分化第12天Ⅲβ-tubulin蛋白荧光定量Figure4FluorescencequantificationofIIIβ-tubulinproteininstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteethA阴性对照组miR-20mimic组miR-20inhibitor组通路抑制剂组联合组543210aaa相对荧光强度B阴性对照组miR2-0mimic组miR-20inhibitor组通路抑制剂组联合组图注：图中A为高尔基银染结果(×400)；B为树突棘密度统计结果。与阴性对照组相比，aP<0.05。图5各组人乳牙牙髓干细胞诱导分化第12天神经元树突棘密度Figure5Dendriticspinedensityofneuronsdifferentiatedfromstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteethat12daysofinductionA阴性对照组miR-20mimic组miR-20inhibitor组通路抑制剂组联合组2.01.51.00.50aa树突棘密度a(个/μm)B阴性对照组miR2-0mimic组miR-20inhibitor组通路抑制剂组联合组a

DengX,YangF,TangXQ,ZhaoY.MicroRNA-20regulatesdirectionaldifferentiationofstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteeth.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2019;23(21):3329-3335.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1761P.O.Box10002,Shenyang110180www.CRTER.org3335[9]HegartySV,SullivanAM,O'KeeffeGW.BMP2andGDF5induceneuronaldifferentiationthroughaSmaddependantpathwayinamodelofhumanmidbraindopaminergicneurons.MolCellNeurosci.2013;56:263-271.[10]白广超,金宏亮,雷堃,等.BMP-7诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元细胞分化的初步研究[J].安徽医科大学学报,2018,53(2):190-195.[11]赵红斌,甄英丽,田蓉,等.Notch和BMP信号通路介导红景天苷促进小鼠骨髓间充质干细胞向神经元细胞定向分化研究[J].中草药,2016,47(13):2294-2300.[12]SunDG,XinBC,WuD,etal.miR-140-5p-mediatedregulationoftheproliferationanddifferentiationofhumandentalpulpstemcellsoccursthroughthelipopolysaccharide/toll-likereceptor4signalingpathway.EurJOralSci.2017;125(6):419-425.[13]ZhangJF,FuWM,HeML,etal.MiRNA-20apromotesosteogenicdifferentiationofhumanmesenchymalstemcellsbyco-regulatingBMPsignaling.RNABiol.2011;8(5):829-838.[14]杨倩娟,刘文佳,常文悦,等.miR-20a对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响[J].实用口腔医学杂志,2016,32(2):186-189.[15]杨鑫,李思洁,赵玮.Wnt信号通路在调控牙髓干细胞多向分化及炎症损伤修复中的作用[J].国际口腔医学杂志,2018,45(3):286-290.[16

【参考文献】：
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本文编号：3240960