AQP5对人呼吸道黏膜下腺细胞水跨膜通透性及粘蛋白合成、分泌影响的研究

发布时间：2021-06-24 03:05

　　目的 旨在探讨质粒介导的短发夹状RNA（shRNA，short hairpin RNA）对人呼吸道粘膜下腺细胞（SPC-A1）水通道蛋白5（aquaporin 5，AQP5）表达的抑制。方法 用免疫荧光双标法检测AQP5和MUC5AC在SPC-A1细胞上的表达。构建能在哺乳动物细胞内表达shAQP5重组质粒，转染SPC-A1细胞。用荧光定量PCR检测mRNA的表达，用FACS和Western杂交检测蛋白表达。结果 AQP5和MUC5AC在SPC-A1上均有表达。与未转染组（Con）和无关转染组（shNeg）比较，shAQP5组细胞AQP5 mRNA表达在转染后1、2天明显降低，3-7天mRNA水平有轻度回调，而蛋白的明显抑制出现在转染后第5天。结论 质粒介导的短发夹RNA（shRNA）可有效抑制人呼吸道黏膜下腺细胞膜AQP5的表达，AQP5蛋白水平的抑制滞后于mRNA水平。若能将RNA干扰用于AQPs的其它亚型将拓展AQPs生理功能的研究。 目的 shRNA介导的AQP5的抑制是否影响SPC-A1细胞渗透压驱动的水跨膜通透性。方法 细胞分3组即Con组，shNeg组，shAQP5... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

阳性克隆菌抽提质粒后双酶切鉴定电泳图

筛选出阳性克隆(图l)，ECoRI、BamHI双酶切鉴定，若核昔酸序列己连接到载体上(图2)海生工生物技术公司测序鉴定，结果shNeg均已成功地连接至IJrsilencer

负载浓度的Caleein一AM进行研究，均未发现SPC一Al细胞存在该现象。我们的灌流结果表明，荧光强度与细胞体积成反比，而与渗透压成正比，即随着渗透压增高，细胞体积缩小，荧光强度增强，反之(图6)。a。荧光变化趋势图 SeriesonGreen，AI!P!anes者的u巴lu门山口﹂田^哎251 lmagePlane图6:渗透压驱动下细胞荧光强度及体积变化趋势。按照300一200一300礴00一300(mosm)的顺序对选定的细胞区域(巧一20个细胞)进行微灌流。a.为荧光显微镜下细胞照片。b.为荧光强度随时间变化的曲线图。

【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠肺气肿组织表皮生长因子受体及黏蛋白表达的关系研究[J]. 毛翎,白春学,王悦虹,张敏.  中国呼吸与危重监护杂志. 2005(01)
[2]表皮生长因子受体和黏蛋白在慢性阻塞性肺疾病气道中的表达及意义[J]. 毛翎,白春学,张敏,王悦虹,陈杰.  中华结核和呼吸杂志. 2004(09)
[3]呼吸道表面液体层的生理功能与测定[J]. 宋元林,白春学.  中华结核和呼吸杂志. 2003(10)
[4]水通道与钠通道在小鼠胸腔液体转运中的作用[J]. 蒋进军,白春学,洪群英,宋元林.  中华结核和呼吸杂志. 2003(01)
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本文编号：3246231