中华按蚊电转化显微注射技术平台的构建及其在基因瞬时过表达中的应用
发布时间:2021-07-13 06:37
【目的】构建在中华按蚊Anopheles sinensis中的电转化显微注射技术平台,并利用该技术平台实现活体基因瞬时过表达对其进行验证,为开展系统的基因功能研究奠定基础。【方法】以CUY21EDITⅡ电转仪为主体构建中华按蚊中的电转化显微注射技术平台;使用同源重组法构建EGFP和Bm-iAANAT基因的瞬时过表达质粒,在中华按蚊化蛹3 h时注射该质粒进入蛹体,随即使用电转仪对注射后的蛹进行电击,待注射个体发育至化蛹39 h时,利用体视荧光显微镜观察蛹体表皮着色和发光情况,并通过荧光定量PCR检测EGFP和Bm-iAANAT的表达。【结果】构建了用于显微注射的PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40和PIZ-modi-Aepub-AANAT-T2A-EGFP-SV40过表达载体。PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40注射组中华按蚊在化蛹39 h时约87.5%的个体成活并正常黑化,这其中约92.7%的个体的表皮检测到明显的绿色荧光,注射无启动子载体PIZ-modi-EGFP-SV40并进行电击的阴性对照组和注射过表达载体PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40但...
【文章来源】:昆虫学报. 2019,62(05)北大核心CSCD
【文章页数】:11 页
【文章目录】:
1 材料与方法
1.1 蚊虫品系
1.2 电转化显微注射平台的仪器设备
1.3 主要试剂与耗材
1.4 瞬时过表达载体的构建
1.5 显微注射中华按蚊蛹及电击操作
1.6 表型观察及基因表达分析
1.7 数据分析
2 结果
2.1 中华按蚊电转化显微注射技术平台的建立
2.2 瞬时过表达载体的构建和验证
2.3 单报告基因质粒在中华按蚊蛹中的表达
2.4 双报告基因质粒在中华按蚊蛹中的表达
3 讨论
【参考文献】:
期刊论文
[1]虫媒疾病传播媒介的研究进展[J]. 王燕红,郑爱华,刘起勇,康乐,邹振. 应用昆虫学报. 2017 (03)
[2]转基因蚊最新研究进展[J]. 杨频. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2011(02)
[3]家蚕转基因技术中若干因素对转基因效率的影响[J]. 马三垣,徐汉福,段建平,赵爱春,张美蓉,夏庆友. 昆虫学报. 2009(06)
博士论文
[1]家蚕安全高效转基因技术体系的研究[D]. 龙定沛.西南大学 2015
本文编号:3281556
【文章来源】:昆虫学报. 2019,62(05)北大核心CSCD
【文章页数】:11 页
【文章目录】:
1 材料与方法
1.1 蚊虫品系
1.2 电转化显微注射平台的仪器设备
1.3 主要试剂与耗材
1.4 瞬时过表达载体的构建
1.5 显微注射中华按蚊蛹及电击操作
1.6 表型观察及基因表达分析
1.7 数据分析
2 结果
2.1 中华按蚊电转化显微注射技术平台的建立
2.2 瞬时过表达载体的构建和验证
2.3 单报告基因质粒在中华按蚊蛹中的表达
2.4 双报告基因质粒在中华按蚊蛹中的表达
3 讨论
【参考文献】:
期刊论文
[1]虫媒疾病传播媒介的研究进展[J]. 王燕红,郑爱华,刘起勇,康乐,邹振. 应用昆虫学报. 2017 (03)
[2]转基因蚊最新研究进展[J]. 杨频. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2011(02)
[3]家蚕转基因技术中若干因素对转基因效率的影响[J]. 马三垣,徐汉福,段建平,赵爱春,张美蓉,夏庆友. 昆虫学报. 2009(06)
博士论文
[1]家蚕安全高效转基因技术体系的研究[D]. 龙定沛.西南大学 2015
本文编号:3281556
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/binglixuelunwen/3281556.html
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