抗肝癌单链抗体融合TNFα的构建、表达及其导向作用的初步实验研究

发布时间：2021-07-23 17:17

　　本课题在胡川闽博士构建的鼠抗人肝癌单克隆抗体HAb25的部分轻链缺失的单链抗体的基础上，以完整的轻链可变区基因替换原部分缺失的轻链可变区基因，重新构建了鼠抗人肝癌单链抗体（mscFv），将其与检测标签E-tag偶连并在原核表达载体pET15b中获得高效融合表达，表达产物（mscFv-E-tag）经初步纯化后进行的活性检测结果显示，mscFv较好地保持了亲本抗体HAb25的抗原结合特异性和亲和性。在此基础上，将mscFv及其经过人源化改造的抗人肝癌单链抗体（hscFv，由军事医学科学院袁清安博士构建）分别与人肿瘤坏死因子α（TNFα）基因偶连，分别构建了PGEX 4T-1 m／hscFv-TNFα抗肝癌双功能抗体的原核融合表达载体，并实现了高效表达，表达产物经纯化后进行的活性检测结果显示，m／hscFv-TNFα均保持了亲本抗体HAb25的抗原结合特性，并对靶细胞（SMMC-7721）具有明确的选择性杀伤作用，进一步的荷肝癌（SMMC-7721）裸鼠体内抑瘤实验结果表明，m／hscFv-TNFα均具有明确的导向杀伤作用。 一、抗肝癌单链抗体的重新构建、表达及其活性检测 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

mscFv诱导表达产物的SDS一PAGE

8.hscFv的活性检测hsFcv竞争结合抑制实验结果表明hsFcv能与靶细胞特异性结合并封闭亲本抗体42%的亲和活性，SABC法测定结果与mscFv的结果一致，表明mscFv人源化后仍较好地保持了亲本杭体的特异性和亲和活性，具有与mscFv基本相同的活性。

16mscFv诱导表达产物SDSPAGE的光密度扫描结45夕2/seOOBC万一档’“嘿一，‘’川路“‘’‘犷能”生猫召图1.8mscFv的竞争结合抑制曲线性对照组，B为mscFv封闭实验组，C为HAb25阳性对

【参考文献】：
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本文编号：3299707