多房棘球绦虫severin基因过表达慢病毒载体的构建及对人正常肝细胞侵袭、迁移能力的影响
发布时间：2021-07-24 16:13
目的构建多房棘球绦虫肌切蛋白（Em severin）基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响。方法扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建重组慢病毒pCDH-Em severin。用pCDH-Em severin感染293T细胞,进行病毒包装并检测病毒滴度。以MOI=50的慢病毒感染人正常肝细胞L02,采用RT-qPCR和Western blot检测Em severin mRNA和蛋白表达水平,并通过Transwell和划痕试验检测过表达Em severin对L02细胞侵袭、迁移能力的影响。结果成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,感染293T细胞并进行包装后,获得滴度为1×108 TU/ml的pCDH-Em severin慢病毒。RT-qPCR和Western blot检测pCDH-Em severin感染组Em severin mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和空载病毒组（F值分别为98.731和86.074,P<0.05）。Transwell...
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(03)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【文章目录】：
材料与方法
1 材料
1.1 质粒、抗血清和细胞
1.2 主要试剂和仪器
2 方法
2.1 Em severin过表达慢病毒载体的构建
2.1.1 Em severin基因的扩增
2.1.2 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体和Em severin基因PCR产物的双酶切
2.1.3 Em severin过表达慢病毒载体的构建及鉴定
2.2 慢病毒包装和滴度测定
2.2.1 293T细胞培养
2.2.2 细胞转染及病毒液的收集
2.2.3 荧光稀释法测定病毒滴度
2.3 L02细胞培养及慢病毒感染
2.3.1 L02细胞培养
2.3.2 慢病毒感染L02细胞
2.3.3 RT-qPCR检测L02细胞中Em severin mRNA表达
2.3.4 Western blot检测Em severin蛋白表达
2.4 Transwell和划痕试验检测细胞侵袭、迁移能力
2.4.1 Transwell试验
2.4.2 划痕试验
2.5 统计学处理
结 果
1 pCDH-Em severin重组慢病毒质粒的构建及鉴定
2 pCDH-Em severin慢病毒包装与滴度测定
3 RT-qPCR检测Em severin mRNA表达
4 Western blot检测Em severin蛋白表达
5 Em severin对人正常肝细胞侵袭、迁移能力的影响
讨 论
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达BDNF基因重组慢病毒转染MSCs的实验研究[J]. 任瑞芳,赵君,贵永堃,闫海清,王昊亮,王桂华,张平. 中国实用神经疾病杂志. 2018(01)
[2]2012-2016年中国棘球蚴病抽样调查分析[J]. 伍卫平,王虎,王谦,周晓农,王立英,郑灿军,曹建平,肖宁,王莹,朱曜宇,牛彦麟,薛垂召,曾祥嫚,房琦,韩帅,余晴,杨诗杰,付青,白雪飞,田添,李军建,张梦媛,吴文婷,张山山,侯岩岩,冯宇,马宵,李斌,李凡卡,郭卫东,杨亚明,吴向林,金小林,张红卫,于石成. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
[3]我国棘球蚴病疾病负担分析[J]. 张梦媛,伍卫平,官亚宜,王立英,侯岩岩,冯宇,马俊英,王谦,王莹,韩帅,薛垂召,吴文婷. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
[4]华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白CsFABP对巨噬细胞免疫功能的影响[J]. 华慧,张波,李向阳,颜超,刘瀛,于倩,汤仁仙,郑葵阳. 中国病原生物学杂志. 2017(11)
[5]HEPN1过表达慢病毒的构建及对人泌乳素型垂体瘤细胞的影响[J]. 冯杰,夏祥国,陈礼刚,陈锐,江勇,张彪,宋志富. 东南大学学报(医学版). 2017(03)
[6]人TPX2基因过表达慢病毒质粒的构建及其人宫颈癌细胞稳定表达株的筛选[J]. 常海平,杨彩荣,郑健. 中国生物制品学杂志. 2017(06)
[7]慢病毒介导的CIB1过表达对人脑胶质瘤细胞增殖和周期影响[J]. 李慧,惠玲,李君红,王晓辉,桑春艳,张富婷,周杰. 中华肿瘤防治杂志. 2017(06)
[8]慢病毒介导的调节因子XⅠ过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用[J]. 程凯,孙浩杰,张明智,沈丽. 中南大学学报(医学版). 2016(11)
[9]多房棘球蚴病的浸润和转移机制研究进展[J]. 黄红,张淑坤. 中国人兽共患病学报. 2016(07)
[10]敲低肌切蛋白可抑制胃肠道间质瘤细胞的增殖能力[J]. 刘军言,刘佳佳,吴益西,陈骞,林勇,钱锋. 第三军医大学学报. 2016(12)
博士论文
[1]Scinderin基因在结直肠癌肝转移中的相关功能研究[D]. 吴海福.复旦大学 2010
本文编号：3300989
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(03)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【文章目录】：
材料与方法
1 材料
1.1 质粒、抗血清和细胞
1.2 主要试剂和仪器
2 方法
2.1 Em severin过表达慢病毒载体的构建
2.1.1 Em severin基因的扩增
2.1.2 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体和Em severin基因PCR产物的双酶切
2.1.3 Em severin过表达慢病毒载体的构建及鉴定
2.2 慢病毒包装和滴度测定
2.2.1 293T细胞培养
2.2.2 细胞转染及病毒液的收集
2.2.3 荧光稀释法测定病毒滴度
2.3 L02细胞培养及慢病毒感染
2.3.1 L02细胞培养
2.3.2 慢病毒感染L02细胞
2.3.3 RT-qPCR检测L02细胞中Em severin mRNA表达
2.3.4 Western blot检测Em severin蛋白表达
2.4 Transwell和划痕试验检测细胞侵袭、迁移能力
2.4.1 Transwell试验
2.4.2 划痕试验
2.5 统计学处理
结 果
1 pCDH-Em severin重组慢病毒质粒的构建及鉴定
2 pCDH-Em severin慢病毒包装与滴度测定
3 RT-qPCR检测Em severin mRNA表达
4 Western blot检测Em severin蛋白表达
5 Em severin对人正常肝细胞侵袭、迁移能力的影响
讨 论
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达BDNF基因重组慢病毒转染MSCs的实验研究[J]. 任瑞芳,赵君,贵永堃,闫海清,王昊亮,王桂华,张平. 中国实用神经疾病杂志. 2018(01)
[2]2012-2016年中国棘球蚴病抽样调查分析[J]. 伍卫平,王虎,王谦,周晓农,王立英,郑灿军,曹建平,肖宁,王莹,朱曜宇,牛彦麟,薛垂召,曾祥嫚,房琦,韩帅,余晴,杨诗杰,付青,白雪飞,田添,李军建,张梦媛,吴文婷,张山山,侯岩岩,冯宇,马宵,李斌,李凡卡,郭卫东,杨亚明,吴向林,金小林,张红卫,于石成. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
[3]我国棘球蚴病疾病负担分析[J]. 张梦媛,伍卫平,官亚宜,王立英,侯岩岩,冯宇,马俊英,王谦,王莹,韩帅,薛垂召,吴文婷. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(01)
[4]华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白CsFABP对巨噬细胞免疫功能的影响[J]. 华慧,张波,李向阳,颜超,刘瀛,于倩,汤仁仙,郑葵阳. 中国病原生物学杂志. 2017(11)
[5]HEPN1过表达慢病毒的构建及对人泌乳素型垂体瘤细胞的影响[J]. 冯杰,夏祥国,陈礼刚,陈锐,江勇,张彪,宋志富. 东南大学学报(医学版). 2017(03)
[6]人TPX2基因过表达慢病毒质粒的构建及其人宫颈癌细胞稳定表达株的筛选[J]. 常海平,杨彩荣,郑健. 中国生物制品学杂志. 2017(06)
[7]慢病毒介导的CIB1过表达对人脑胶质瘤细胞增殖和周期影响[J]. 李慧,惠玲,李君红,王晓辉,桑春艳,张富婷,周杰. 中华肿瘤防治杂志. 2017(06)
[8]慢病毒介导的调节因子XⅠ过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用[J]. 程凯,孙浩杰,张明智,沈丽. 中南大学学报(医学版). 2016(11)
[9]多房棘球蚴病的浸润和转移机制研究进展[J]. 黄红,张淑坤. 中国人兽共患病学报. 2016(07)
[10]敲低肌切蛋白可抑制胃肠道间质瘤细胞的增殖能力[J]. 刘军言,刘佳佳,吴益西,陈骞,林勇,钱锋. 第三军医大学学报. 2016(12)
博士论文
[1]Scinderin基因在结直肠癌肝转移中的相关功能研究[D]. 吴海福.复旦大学 2010
本文编号：3300989
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