鼠尾血管内皮细胞分离、培养及鉴定

发布时间：2017-04-28 02:03

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【摘要】：血管内皮细胞(VEC)由一层扁平上皮细胞组成,衬贴在血管内侧,形成血管的内壁。血管内皮细胞具有多种功能,除了具有屏障作用之外,血管内皮细胞还可以合成、分泌多种细胞因子,在血管运动、炎症损伤以及免疫应答中具有重要作用。自从人血管内皮细胞的培养方法被报道之后,其它动物来源的血管内皮细胞分离与培养方法也陆续被报道。内皮细胞体外培养的成功具有重要意义,既可以此研究血管内皮细胞的结构与功能,同时也可以为血管生成在多种疾病发生与发展中的作用研究奠定基础。内皮细胞培养方法常采用组织块法和酶消化法等,但这些方法都有各自的缺点,还需要逐步改进与完善。血管抑素(Angiostatin)可以显著抑制血管内皮细胞的增殖与迁移,进而抑制血管生成过程。由于血管生成在肿瘤发生和转移过程中具有的重要作用,因此,通过血管抑素的抗血管生成作用而抑制肿瘤细胞的生长和转移,对于肿瘤治疗是非常有潜力的,目前正处于临床实验阶段。贯叶连翘(Hypericum perforatum Linn)是藤黄科金丝桃属植物。贯叶连翘提取物中具有多种化学成分,具有抗抑郁、抗肿瘤、抗病毒等多种作用。在成功构建鼠尾血管内皮细胞培养方法之后,我们又通过血管抑素及贯叶连翘提取物对这种血管内皮细胞增殖的影响进行了试验观察。本论文主要研究结果如下:1.鼠尾血管内皮细胞培养从小鼠尾部剥离出血管,去掉血管表面组织,血管表面经胶原酶消化,将血管切成小段后移至培养板中,包被基质胶后加入培养基培养,2天后可见内皮细胞从血管边缘扩散生长,逐渐形成细胞集落。镜下可见,细胞融汇成片后呈典型的“卵石铺路样”排列。2.血管内皮细胞鉴定经血管内皮细胞表面标志物CD31抗体鉴定,95%以上的细胞为血管内皮细胞,证实了利用小鼠的尾部血管作为血管内皮细胞来源,建立体外细胞培养方式的可行性。3.血管抑素对血管内皮细胞的抑制作用在建立血管内皮细胞原代培养方法的基础上,我们采用MTT法对重组人血管抑素K1-3(rh K1-3),进行了部分生物学活性检测。检测结果发现:rh K1-3对血管内皮细胞生长具有显著的抑制作用,并存在一定的量效关系。4.贯叶连翘提取物对血管内皮细胞增殖的影响将贯叶连翘提取物与血管内皮细胞共培养,药物终浓度分别为0.025μg/ml、0.25μg/ml、2.5μg/ml。MTT法检测结果表明:在0.25μg/ml浓度下,贯叶连翘提取物可增强血管内皮细胞的活力。
【关键词】：血管生成 原代培养 血管抑素 贯叶连翘提取物 药物筛选
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
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