人arresten的cDNA克隆，大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及生物学活性的初步研究

发布时间：2021-08-03 11:27

　　肿瘤的生长，转移依赖于周围血管的生成，当肿瘤组织生长到2mm3时，必须血管供给营养才能继续生长，否则肿瘤细胞会“饿死”。目前，已经发现了很多血管生成抑制剂如endostatin, restin ,tumstatin,canstatin, arresten等, 它们都能抑制肿瘤生长，endostatin在美国即将上市。其中arresten是最新和研究最少的一个血管生成抑制肽。Arresten是四型胶原α1链的NC端，分子量为26kD,等点电6.4，为229个氨基酸，Colorado发现它能抑制内皮细胞的增殖和新血管的生成。本课题运用基因克隆技术，克隆和表达了arresten基因。首先用Trizol从汉族人肝脏提取总RNA，逆转录合成cDNA第一链。 使用软件RNASTRUCTRUE3.5分析四型胶原的α1链的cDNA，发现arresten基因能形成复杂的二级结构，严重影响PCR扩增时引物与模板的配对，故采用巢式PCR扩增arresten基因。利用一步法克隆新技术构建表达质粒，并转染到大肠杆菌中进行表达。第一部分：一步法克隆新技术利用T4 DNA Polymerase 的3’-5’的外切活... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

发现在72小时时重组菌表达的arresten

29re2.2 The layout of the construction of the vector pPIC9-arresten and its integration with pichiagenome2 载体 pPIC9-arresten的构建和与毕赤酵母染色体的整合

图 2.5 SDS-PAGE 分析表达蛋白Fig.2.5 SDS-PAGE analysis of expressed arresten1. 72h supernatant of GS115 conditioned medium 20ul2. Protein marker (14, 20, 24, 29, 36, 45, 66kD)3. 24h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul4. 36h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul5. 48h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul6. 60h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul7. 72h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul8, 90 h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul9,102h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul


本文编号：3319535