小鼠VCAM-1表达载体的构建及稳定高表达间充质干细胞系C3H10T1/2的建立

发布时间：2021-08-08 05:35

　　本研究旨在构建小鼠血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）的逆转录病毒载体,通过转染建立稳定高表达VCAM-1的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）,并初步探讨VCAM-1基因过表达对MSC免疫学特性的影响。以小鼠脾脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入PMSCVmigr-1逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒表达质粒PMSCVmigr-1-mVCAM-1,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术转染293细胞,收获含有病毒颗粒的上清;用病毒上清感染间充质干细胞系（C3H10T 1/2）并检测其表达。采用3H-TdR掺入法测定高表达VCAM-1的MSC在淋巴母细胞转化实验中对淋巴细胞增殖的抑制作用。结果表明:酶切和测序鉴定证实,正确构建了小鼠VCAM-1的重组逆转录病毒表达质粒。逆转录病毒上清感染MSC后流式细胞术检测到目的基因VCAM-1在MSC表面高表达。高表达VCAM-1的MSC对刀豆素A诱导的淋巴细胞... 

【文章来源】：中国实验血液学杂志. 2014,22(05)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
材料和方法
    材料
    主要仪器设备
    小鼠脾脏组织中总RNA的提取
    目的基因片段的体外扩增
    重组质粒的构建和鉴定
    细胞T293的重组质粒转染包装
    间充质干细胞系C3H10T1/2的病毒上清感染
    对转染细胞的检测
    MSC滋养层的建立
    淋巴母细胞转化实验 (LTT)
    统计学处理
结果
    RT-PCR扩增的小鼠VCAM-1的鉴定
    重组逆转录病毒质粒MIGR1-VCAM-1的构建及鉴定
    逆转录病毒质粒及重组逆转录病毒质粒在包装细胞T293中的转染率
    VCAM-1在间充质干细胞系C3H10T 1/2细胞中稳定高表达
    过表达VCAM-1的间充质干细胞系C3H10T 1/2细胞抑制刀豆素A引起的T细胞增殖
讨论



本文编号：3329333