NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究

发布时间：2021-08-09 04:29

　　目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子（germ cell nuclear factor,NR6A1）对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组（空载和pcore-Rluc共转染）相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009（P=0.000）。NR6A1过表达时,BCP（核心启动子,PCH9-1744-Rluc）实验组荧光素酶活性相对值（0.504±0.023）较对照组（空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1... 

【文章来源】：重庆医科大学学报. 2019,44(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

HepG2细胞中不同核受体基因过表达对荧光素酶活性的影响

=0.000），说明在HepG2细胞中过表达NR6A1可以明显抑制HBVDNA的复制水平。2.5NR6A1在HepG2细胞中过表达抑制HBVRNA转录上述结果证明NR6A1能够抑制HBVDNA复制。为了进一步研究抑制作用是否是通过抑制HBVRNA转录水平所引起的，分别将NR6A1表达质粒与HBV1.3（实验组）或者空载体与HBV1.3（对照组）共转染HepG2细胞，Northernblot检测细胞总RNA。Northernblot结果提示实验组RNA表达量相对于对照组明显下降（图4），RNA表达灰度值相对定量a：与对照组比较，P＜0.05图1HepG2细胞中不同核受体基因过表达对荧光素酶活性的影响图2Westernblot检测NR6A1过表达a：与对照组比较，P＜0.05图3NR6A1过表达在HepG2细胞中可抑制HBVDNA复制相对荧光素酶活性1.51.00.50.0ControlNR1D2NR1I3NR6A1THRBRARGNR3C2NR1H2RORAaaaaaaaaNR6A1-3Flagβ-actin56kD43kDVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3NR6A1+HBV1.3Vector+HBV1.3Vector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3rcDNAssDNAcoreDNA12孔板6孔板1.51.00.50.0HBVDNA灰度值相比aVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3—292—

A的复制水平。2.5NR6A1在HepG2细胞中过表达抑制HBVRNA转录上述结果证明NR6A1能够抑制HBVDNA复制。为了进一步研究抑制作用是否是通过抑制HBVRNA转录水平所引起的，分别将NR6A1表达质粒与HBV1.3（实验组）或者空载体与HBV1.3（对照组）共转染HepG2细胞，Northernblot检测细胞总RNA。Northernblot结果提示实验组RNA表达量相对于对照组明显下降（图4），RNA表达灰度值相对定量a：与对照组比较，P＜0.05图1HepG2细胞中不同核受体基因过表达对荧光素酶活性的影响图2Westernblot检测NR6A1过表达a：与对照组比较，P＜0.05图3NR6A1过表达在HepG2细胞中可抑制HBVDNA复制相对荧光素酶活性1.51.00.50.0ControlNR1D2NR1I3NR6A1THRBRARGNR3C2NR1H2RORAaaaaaaaaNR6A1-3Flagβ-actin56kD43kDVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3NR6A1+HBV1.3Vector+HBV1.3Vector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3rcDNAssDNAcoreDNA12孔板6孔板1.51.00.50.0HBVDNA灰度值相比aVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3—292—


本文编号：3331366