人巨细胞病毒pp150和gp52融合基因的克隆表达及其重组蛋白的抗原性研究

发布时间：2021-08-27 19:20

　　人巨细胞病毒（HCMV）是人类重要的病原体之一，孕妇初次感染HCMV，可导致胎儿畸形或流产，HCMV的活动性感染可以危及免疫抑制患者的生命。鉴于感染患者常常无症状或缺乏特异性症状，实验室检测技术具有极其重要的意义。 HCMV感染的检测方法包括病毒分离培养、抗原检测、核酸测定和血清学试验，上述方法各有优缺点。HCMV原发感染的诊断，主要采用血清学方法，HCMV-IgM型抗体是病毒抗原刺激机体最早出现的抗体，可作为活动性HCMV感染的一个重要指标。用于诊断HCMV-IgM的酶联免疫吸附试验（ELISA）最为常用，具有操作简便、快速和设备要求低的特点，但来源于病毒的抗原存在着敏感性、特异性和标准化问题，基因重组获得表达产物的技术正引起各国学者重视，国内这方面的研究报道不多。 目前已知为数不多的几种HCMV蛋白具有免疫活性，其中gp52和pp150是抗原性较强的两种，能特异性识别IgM抗体。故而，本研究选择HCMV gp52和pp150的抗原性、特异性好的C端部分氨基酸的基因片段做目的基因，应用基因工程技术，得到了高效表达两者融合基因的工程菌，并对表达产物的抗原性进行了研究。研究包... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

gP52基因的PcR扩增结果

100一一512bP图1一2gP52基因的PcR扩增结果M.相对分子质量标准DL200O;1一3.PCR扩增的gp52基因片段2重组质粒T一gp52的构建和鉴定将PCR扩增产物回收纯化后，与pGEM一T克隆载体连接，转化大肠杆菌OHS。，在含氨节青霉素、工PTG和X一gal的LB平板上，挑选白斑进行菌落PCR鉴定，得到正确克隆的基因片段(图1一3)。重组质粒T一gp52用EcoRI、sa了I分别酶切后，产生了512bp的目的基因片段(图1一4)。3重组质粒T一gp52插入gp52基因片段的序列测定将阳性克隆的T一gp52进行DNA序列分析，结果表明克隆基因片段与HCMv标准株AD169株gp52蛋白C端设计的基因序列一致

GGAGGAGGCGGCGGTTTGGATCGCAACTCCGGCAATTACTTCAACGACGCGAAAGAGGAGAGCGACAGCGAGGATTCTGTAACGTCAGCTGC图1一5gp52基因片段的序列测定结果3PGEx一gp52重组体的构建与鉴定利用Ec解I和施了I分别酶切克隆在pGEM一T载体上的gp52基因，电泳回收目的基因，将其插入同样酶切的pGEX一SX一3表达载体上，连接产物转化大肠杆菌后，利用氨节青霉素抗性筛选，进行菌落PCR鉴定，10个克隆均扩增出了512bp的DNA片段。在这10个克隆中随机挑选两个克隆提取重组质粒后，进行Ec口尸I和sall双酶切鉴定，均切出了slZbp的DNA片段


本文编号：3366943