碳水化合物反应元件结合蛋白条件性基因敲除小鼠模型的建立及鉴定

发布时间：2021-09-06 21:21

　　目的建立转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）的条件性基因敲除小鼠模型,为研究ChREBP的体内生物学功能提供技术手段。方法和结果利用Cre/loxP基因打靶策略,通过构建基因打靶载体和基于胚胎干细胞（ES细胞）的基因同源重组,在ChREBP基因第8外显子的两侧分别引入loxP位点;将打靶成功的ES细胞显微注射至小鼠囊胚,然后植入假孕雌鼠子宫获得嵌合鼠,进一步获得可种系传代的ChREBP?ox/+小鼠;将ChREBP?ox/+小鼠与Alb-Cre小鼠交配,获得ChREBP的肝脏特异性基因敲除小鼠。结论建立了ChREBP条件性基因敲除小鼠模型,为揭示不同组织中ChREBP的生理功能和病理学意义提供了重要手段。 

【文章来源】：第二军医大学学报. 2019,40(02)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 主要材料
        1.1.1 质粒、菌株与动物
        1.1.2 试剂
    1.2 ChREBP打靶载体的构建
        1.2.1 敲除外显子的选择
        1.2.2 预打靶载体的构建
        1.2.3 loxP-neo-loxP片段的插入
        1.2.4 Frt-neo-Frt片段的插入
    1.3 ES细胞的基因打靶与筛选
        1.3.1 ES细胞培养
        1.3.2 ES细胞电穿孔DNA转染
        1.3.3 正负药物筛选
        1.3.4 双抗性细胞克隆的挑取与培养
        1.3.5 ES细胞同源重组克隆的PCR鉴定
        1.3.6 ES细胞的囊胚注射及胚胎移植
    1.4 条件敲除小鼠的繁育与鉴定
        1.4.1 首建鼠的繁育及neo基因去除
        1.4.2 条件敲除小鼠构建
        1.4.3 小鼠基因型鉴定
        1.4.4 小鼠肝脏ChREBP敲除鉴定
2 结果
    2.1 ChREBP打靶载体的构建及鉴定
    2.2 ES细胞的基因打靶与同源重组鉴定
    2.3 首建鼠的获得与繁育
    2.4 条件敲除小鼠的建立
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体[J]. 李玲,国蓉,常绪生,印慨,张晔,刘志民,章卫平.  第二军医大学学报. 2014(02)
[2]转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白对肝脏糖脂代谢的调节作用[J]. 周露婷,章卫平.  第二军医大学学报. 2011(03)



本文编号：3388186