Luciferase2/mKate2双报告基因对小鼠骨髓间充质干细胞的标记及活体光学成像研究

发布时间：2021-09-06 23:29

　　【目的】Luciferase2/mKate2双报告基因标记小鼠骨髓间充质干细胞（mMSC）,并进行活体生物发光和荧光双模态光学成像研究。【方法】全骨髓细胞贴壁分离法提取mMSC,进行细胞表面标志物和多向分化潜能的鉴定;CMVLuciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC,根据细胞内远红荧光蛋白mKate2的表达水平评估转染效率并利用流式细胞仪进行纯化筛选;对筛选后的mMSC（mMSC-CMV-Luc2-mKate2,mKate2+>95%）进行活体生物发光和荧光双模态光学成像。【结果】成功分离mMSC;表型分析结果显示mMSC高表达Sca-1（94.5%）、CD44（99.6%）,低表达CD11b（0.092%）、CD45（0.11%）;mMSC具有成脂和成骨分化能力。CMV-Luciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC 96 h后,细胞内mKate2的荧光表达率为22.97%,经流式细胞仪筛选后mKate2表达率大于95%。对筛选后的mMSC进行活体生物发光成像和荧光成像可探测光信号,光信号强度与细胞数量呈明显线性正相关（生物发光成像为R2=0.9893;荧光... 

【文章来源】：中山大学学报(医学科学版). 2014,35(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养、细胞表型分析和分化潜能鉴定
        1.1.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养
        1.1.2 小鼠骨髓间充质干细胞的表型分析
        1.1.3 小鼠骨髓间充质干细胞的分化潜能鉴定
    1.2 CMV-Luciferase2-m Kate2对小鼠骨髓间充质干细胞的标记
        1.2.1 慢病毒包装
        1.2.2 慢病毒活性滴度测定
        1.2.3 CMV-Luciferase2-m Kate2慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞
    1.3 活体光学成像
    1.4 统计学分析
2 结果
    2.1 m MSC的形态及鉴定
    2.2 慢病毒在293FT细胞的包装及滴度测定
    2.3 CMV-luciferase2-m Kate2对m MSC的标记及流式筛选
    2.4 m MSC-CMV-Luc2-m Kate2的光学成像
3 讨论



本文编号：3388394