神经科学研究中人类脑片培养技术的建立和评价

发布时间：2017-05-02 04:02

  本文关键词：神经科学研究中人类脑片培养技术的建立和评价，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立和优化离体脑组织切片的培养方法，，制备适用于活组织电生理学研究的人类脑片标本。 方法：（1）建立稳定的Wistar幼鼠脑片体外培养方法：优化啮齿类脑片培养技术，在切片和培养记录过程中使用不同成分的改良人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF），采用界面下培养-快速层流技术,在48h内动态观察脑片局域场电位（local field potential，LFP）变化，采用HE染色、氯三苯四唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色、尼氏染色动态观察脑片组织病理学变化。（2）人类脑片体外培养方法：在优化啮齿类脑片培养方法的基础上，采用神经外科深部脑肿瘤切除手术过程中，开窗切除的非病理大脑皮层组织迅速进行转运、修块和进行体外切片培养，并同上过程监测脑片LFP和神经元组织病理学变化。 结果：（1）幼鼠和人类脑片LFP电生理信号均可持续48h以上，但随着培养时间的延长呈衰减趋势；（2）HE染色计数脑片神经元死亡率随时间呈递增趋势，人类和幼鼠脑片均可维持50%以上神经元存活达24h；（3）TTC染色脑片IOD值随时间呈递减趋势，培养24h后呈衰减趋势，48h组仍可见红色区域，各观察时间点人类脑片与幼鼠比较未见明显差异（P0.05）；（4）尼氏染色IOD值随时间呈递减趋势，幼鼠和人类脑片在24h后明显降低，48h后降至较低水平。 结论：人类脑片培养存活时间与啮齿类脑片相似，可以在切片后保存半数以上的神经元存活达24h以上，能够满足活细胞神经电生理研究要求。采用不同的切片和培养ACSF溶液，联合液面下培养-快速层流技术，可以满足手术切除的人类非病理大脑皮层组织体外切片培养前经过1h左右的运输时间。
【关键词】：人类脑片 电生理学 脑片培养
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 中英文缩略词对照表9-10
• 第1章 绪论10-13
• 第2章 综述13-28
• 2.1 大脑皮质解剖结构13-14
• 2.2 神经元培养概述14-15
• 2.3 脑片培养方法15-17
• 2.3.1 急性脑片培养15-16
• 2.3.2 器官型脑片培养16-17
• 2.4 脑片培养的影响因素17-24
• 2.4.1 脑片营养成分18-23
• 2.4.2 脑片制备和培养方式23-24
• 2.5 脑片存活质量评价24-25
• 2.6 人类脑片培养25-28
• 第3章 材料和方法28-37
• 3.1 主要试剂28
• 3.2 主要仪器28-29
• 3.3 实验标本29
• 3.4 药物准备和预处理29-30
• 3.5 标本制备30-31
• 3.6 脑片局域场电位记录31-32
• 3.7 组织学染色观察32-35
• 3.7.1 HE 染色原理32-33
• 3.7.2 HE 染色步骤33-34
• 3.7.3 TTC 染色原理34
• 3.7.4 TTC 染色步骤34
• 3.7.5 尼氏染色原理34-35
• 3.7.6 尼氏染色步骤35
• 3.8 统计学分析35-37
• 第4章 结果37-45
• 4.1 幼鼠和人类脑片电生理信号37-40
• 4.2 组织学指标40-45
• 4.2.1 HE 染色40-42
• 4.2.2 TTC 染色42-43
• 4.2.3 尼氏染色43-45
• 第5章 讨论45-50
• 第6章 结论50-51
• 参考文献51-57
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果57-58
• 致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：340216