脱氧核酶及锁核酸核酶对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的研究

发布时间：2021-10-07 09:02

　　乙型肝炎病毒（HBV）感染是急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要原因。全世界约有3.5亿人感染乙型肝炎病毒,其中约25-40%的病人最终死于该病的并发症。目前尚无特效药物,因此,开发新型、廉价、高效、副作用小、稳定且有靶向性的基因治疗药物已成为治疗该病的重要途径。脱氧核酶（DNAzyme）是一种具有酶活性的DNA分子。它的结构极似锤头样核酶,含有一保守的催化区和两个可变的侧翼结合区。它可以特异性地与靶RNA配对,切割靶RNA而使其失去生物学活性。锁核酸核酶（LNAzyme）是DNAzyme的一种衍生物,是在DNAzyme的两个结合臂上引入一个或几个LNA单体而形成的。通过LNA单体的引入,使其对RNA的切割能力明显提高,且特异性强。HBV复制过程中包括一个逆转录过程,针对HBV前基因组RNA的特定区域设计合成HBV特异性的脱氧核酶及锁核酸核酶,可以阻断HBV的复制和表达。本实验针对HBV设计合成了未修饰的10-23DNAzyme、点硫代修饰的10-23DNAzyme及LNAzyme。用其转染HepG2.2.15细胞,观察它们对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg表达的抑制作... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

LNA和DNA的结构

四、LNAzyme 的结构与切割效率LNAzyme 是在 DNAzyme 的两个结合臂上引入一个或几个 LNA 类单体而形成的，在 10-23DNAzyme 的每个结合臂上引入几个 LNA 想呢？Vester 等[30]研究了引入 LNA 单体的最适宜个数，使得 LNAz接近底物 RNA 结构中特异性靶位点，使容易切割，又有利于释放，使 LNAzyme 能够自由地在另一个底物分子上发动新一个循环的。研究表明，每引入一个 LNA 单体，就显著增加了它们的结合亲和链温度（Tm）提高，在 18 聚体的寡核苷酸中每引入一个 LNA 单 增加 1.5-4℃，故引入 LNA 单体可显著提高 LNAzyme 与靶序列有效力[26]。但是，LNA 单体显著提高了 LNAzyme 与 RNA 形成双螺旋度[5-7]。因此，过多的 LNA 在 DNAzyme 的结合臂将很可能降低 RN的解离率[30]。实验结果表明，在每个结合臂上引入 2-3 个 LNA 图 1-2 DNAzyme 与 LNAzyme 二级结构

0-23DNAzymeNAzyme（10-23DNA 酶或脱氧核酶）的命名是源于它的第 10 轮循环的第 23 个克隆[50]。该酶具有许多优点如切割序列要求十分简单；催化切割效率极高，超过过某些蛋白质酶；更令人兴奋的是，当 Mg2+浓度降至高的活性；该酶其催化活性区高度保守[53-56]。23DNAzyme 的结构及靶位特征：它的结构极似锤头样守的催化区和 2 个可变的侧翼结合区。其催化区序列，为 5’-GGCTAGCTACAACGA-3’，其序列高度保守合区，即底物识别区，一般两个侧翼长约 7-9 个核ck 碱基配对原则与靶 RNA 特异性结合。10-23DNAzy交汇点，即 5’-R↓Y-3’（R=A 或 G，Y=U 或 C，↓的磷酸二酯键），其中 R 不形成碱基配对，Y 则必须图 1-3 8-17DNAzyme 和 10-23DNAzyme 结构图

【参考文献】：
期刊论文
[1]脱氧核酶在转基因肝癌细胞中对HCV5′-非编码区的抑制活性[J]. 于乐成,王升启,顾长海,陈忠斌,毛青,刘鸿凌.  中华传染病杂志. 2004(02)
[2]10-23DNA酶体外切割HBV前C/C区mRNA的初步研究[J]. 郑锦辉,王峰,牛俊奇.  临床肝胆病杂志. 2002(06)
[3]锤头状核酶在HepG2.2.15细胞内的抗HBV特性[J]. 冯英,孔玉英,汪垣,祁国荣.  生物化学与生物物理学报. 2002(02)



本文编号：3421749