A群脑膜炎多糖蛋白结合疫苗的化学修饰及修饰后免疫学性质研究

发布时间：2017-05-03 19:09

  本文关键词：A群脑膜炎多糖蛋白结合疫苗的化学修饰及修饰后免疫学性质研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：脑膜炎奈瑟式球菌会引起严重的疾病比如脑膜炎,作为一种关键的致病因素,脑膜炎荚膜多糖曾作为疫苗用于预防脑膜炎,但免疫效果较差,不能引起免疫记忆。近年来,多糖结合疫苗的发展一定程度上解决了这个问题。相比传统多糖疫苗,多糖蛋白结合疫苗是T细胞依赖性抗原,对两岁以下婴幼儿的保护效果有较大幅度提升并有免疫记忆。但已有研究发现当载体预免疫结合疫苗的蛋白时,C群脑膜炎荚膜多糖与破伤风类毒素的结合物在0.025-0.25μg剂量下,多糖的免疫原性提高,在25μg以上时,多糖的免疫原性却降低。即在预免疫载体蛋白过载时,会导致多糖免疫原性抑制(CIES现象)。同时,在多价结合疫苗中应用相同载体蛋白时,会使其中一种或多种成分不能充分发挥免疫反应。但还不清楚抑制还是提高蛋白特异性免疫原性可以提高结合疫苗的多糖特异性免疫原性。另外载体蛋白有特异性,因此研究载体对多糖免疫原性的影响对结合疫苗的发展有重要作用。本实验使用FDA批准使用的线性PEG和载体破伤风类毒素(TT)本身做修饰剂,制备出三种A群脑膜炎结合疫苗。该方法由如下步骤组成:(1)用溴化氰活化脑膜炎球菌多糖,然后用异型双功能试剂N-2-胺乙基-马来酰亚胺衍化活化脑膜炎球菌多糖;(2)载体蛋白的巯基化;(3)衍化的脑膜炎球菌多糖与巯基化的载体蛋白结合;(4)载体蛋白的PEG修饰;当PEG与PS的质量比为3:10,10:10及修饰剂TT与PS质量比1:1时,蛋白的Ig G抗体滴度为修饰前的0.89倍,0.49倍,1.61倍。多糖的Ig G抗体滴度分别是修饰前的2.6倍,0.63倍,0.56倍。我们假设PEG适当抑制蛋白的免疫原性,有利于多糖免疫原性的提高,PEG过度修饰,强烈抑制载体的免疫原性,因不能充分形成APC-MHCII-TCR,不能充分激活T辅助细胞,从而激活成熟B细胞,多糖免疫原性反而下降。TT修饰载体时,蛋白的抗原表位剧烈增多,与多糖半抗原竞争成熟B细胞从而产生很强的载体免疫原性并削弱多糖免疫原性。温和PEG化载体修饰的脑膜炎多糖结合疫苗可开发为供人体免疫接种用的新型、高效多糖结合疫苗,用于预防流行性脑膜炎奈瑟氏球菌引起的感染,也可用于优化联合疫苗的免疫计划和设计理想载体蛋白。
【关键词】：脑膜炎荚膜多糖 结合疫苗 聚乙二醇化 寡聚体化 多糖特异性免疫
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 绪论11-25
• 1.1 脑膜炎双球菌11-13
• 1.2 脑膜炎疫苗的发展13-15
• 1.3 聚乙二醇的研究和应用现状15-16
• 1.4 双功能交联剂16-17
• 1.5 脑膜炎荚膜多糖结合蛋白疫苗纯化技术17-19
• 1.6 脑膜炎多糖结合疫苗常用表征方法19-21
• 1.7 脑膜炎多糖结合疫苗的免疫学性质评价21
• 1.8 立题依据与实验思路21-25
• 第二章 A群脑膜炎荚膜多糖结合疫苗的载体蛋白修饰25-38
• 2.1 实验材料25-26
• 2.2 实验方法26-32
• 2.3 结果与分析32-37
• 2.4 结论37-38
• 第三章 A群脑膜炎多糖结合疫苗的结构鉴定38-45
• 3.1 引言38
• 3.2 材料与设备38
• 3.3 实验方法38-40
• 3.4 实验结果与讨论40-44
• 3.5 本章小结44-45
• 第四章 A群脑膜炎多糖结合疫苗免疫学性质评价45-60
• 4.1 引言45
• 4.2 实验材料45-46
• 4.3 实验方法46-52
• 4.4 结果与讨论52-57
• 4.5 本章讨论57-59
• 4.6 本章总结59-60
• 第五章 结论与展望60-62
• 5.1 本文研究成果60-61
• 5.2 论文创新点61
• 5.3 论文展望61-62
• 参考文献62-68
• 英文缩写表68-69
• 作者攻读学位期间的科研成果69-70
• 致谢70

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 雍元,杜琳,邱晓玲,王燕,何向东,谢贵林;不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗小鼠免疫原性对比试验[J];微生物学免疫学进展;2003年04期

2 雍元,杜琳,杜送田,王燕,陈志宏,谢贵林;痢疾多糖-蛋白结合疫苗小鼠母子抗体传递试验[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年08期

3 李玉;邱炳光;陈慧雯;吴晓英;;b型流感嗜血杆菌结合疫苗副反应观察[J];华南预防医学;2006年02期

4 王玺;沈荣;;多糖-蛋白结合疫苗的结合化学与检测方法[J];中国生物制品学杂志;2008年10期

5 潘慧远;;国产b型流感嗜血杆菌结合疫苗和进口b型流感嗜血杆菌结合疫苗副反应的观察[J];中国医疗前沿;2013年04期

6 杜琳;蒋仁生;;由结合疫苗产品历史沿革带来的思考[J];微生物学免疫学进展;2013年06期

7 徐程林;对蛋白-多糖结合疫苗中的未结合蛋白的高效快速吸附[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2001年05期

8 赵娜娜;张才军;王玲;;糖结合疫苗及其免疫干扰的研究进展[J];中国医学创新;2013年24期

9 林云;b型流感杆菌结合疫苗[J];国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册);2005年05期

10 谭小梅;刘月萍;朱亚萍;张桓;杜琳;;b型流感嗜血杆菌结合疫苗中载体蛋白质的效力研究[J];微生物学免疫学进展;2007年03期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 吴兵;刘方蕾;王晶;侯亚莉;赵志强;杨明;崔萱林;谢贵林;;C群奈瑟氏脑膜炎球菌结合疫苗工艺稳定性及免疫原性研究[A];2011中国生物制品年会暨第十一次全国生物制品学术研讨会论文集[C];2011年

2 谢贵林;谭小梅;杜琳;田玉珍;张谦;赵志强;王燕;崔萱林;朱莉萍;;b型流感嗜血杆菌结合疫苗的研制及应用[A];预防医学学科发展蓝皮书（2006卷）[C];2006年

3 农艺;李艳萍;李亚楠;陈福生;李春松;黄月葵;叶强;;b型流感嗜血杆菌结合疫苗免疫原性的比较研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前6条

1 李峰;徐守盛会见意大利客人[N];甘肃日报;2008年

2 王纯朴;我市生物产业将达国际先进水平[N];兰州日报;2008年

3 记者 赵一蕙;*ST北生重组果然有“后招” 罗益生物登场取代尖山光电[N];上海证券报;2012年

4 记者 杨勇;沃森生物净利增三成三股东去年四季度减持[N];第一财经日报;2012年

5 记者 冯立中;婴幼儿接种AC群流脑结合疫苗是安全的[N];健康报;2012年

6 记者 陈文忠;投资4.51亿研发生产疫苗[N];云南日报;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王明清;b型流感嗜血杆菌结合疫苗结合及冻干制备工艺相关研究[D];昆明医科大学;2015年

2 张婷婷;A群脑膜炎多糖蛋白结合疫苗的化学修饰及修饰后免疫学性质研究[D];南华大学;2015年

3 杜倩;b型流感嗜血杆菌D蛋白的克隆、表达、纯化及作为结合疫苗载体的初步研究[D];暨南大学;2011年

4 高润光;以重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究[D];河北北方学院;2013年

5 印丹;三种Hib结合疫苗的免疫原性研究[D];重庆医科大学;2010年

6 尹珊珊;Hib PRP-TT结合疫苗的制备及其免疫原性研究[D];延边大学;2009年

7 杨育芳;B群链球菌多糖-蛋白质结合疫苗的研究和制备[D];西北大学;2004年

8 王春娥;白喉无毒变异体CRM_（197）的克隆、表达、纯化及作为结合疫苗蛋白载体的初步应用[D];中国药品生物制品检定所;2007年

9 董岩;肠道细菌O多糖结合疫苗生物合成研究[D];中国食品药品检定研究院;2015年

10 辛伟;实验性伤寒Vi多糖结合疫苗的初步研究[D];北京生物制品研究所;2001年

  本文关键词：A群脑膜炎多糖蛋白结合疫苗的化学修饰及修饰后免疫学性质研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：343569