恶性疟原虫乳酸脱氢酶的表达、纯化、单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2021-11-07 01:44

　　疟疾是一种严重危害人类健康的虫媒性传染病，尤其在热带、亚热带地区流行广泛。据WHO统计，全球每年有近3-5亿人感染疟疾，其中约300万人死亡。在我国也有24个省、市及自治区不同程度地存在疟疾流行。据我国卫生部疟疾委员会最新资料显示，南部地区如云南、广西、海南等省疟疾发病率较往年都有不同程度的提高，因此，疟疾的防治始终是寄生虫病研究的重点之一。疟疾的诊断是疟疾防治工作中的一个重要环节，目前疟疾诊断技术正朝着简便、快速、灵敏、特异及结果易于判定的方向发展，而以单抗为基础的Dipstick免疫层析技术具有以上优点，应用前景广泛。本研究旨在利用疟原虫的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）为诊断靶抗原，通过对该蛋白进行克隆、表达，制备单抗，并筛选、配对建立反应模式等系列研究，开发用于疟疾快速诊断的免疫层析检测试剂盒。 研究中，首先将恶性疟原虫的LDH（Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase, LDHpf）基因克隆至pET-23a（+）表达载体中，构建pET23-LDH重组质粒。重组质粒在BL21中得到高效表达，S... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pET23一LDH重组质粒的酶切鉴定l、分子量标准2、EeoRI+salx酶切pGEx一LDH3、sall酶切pET一23

为可溶性表达。用凝胶光密度图像分析系统检测目的蛋白占菌体总蛋白的41.2%(图1一6)。20.114.4图1一6重组蛋白的SDS一PAGE分析1、蛋白质分子量标准2、诱导前的pET23一LDH3、诱导后的pET23一LDH4、诱导前的pGEX一LDHS、诱导后的pGEx--LDH6、重组菌pET23一LDH超声后沉淀7、重组菌pET23一LDH超声后上清Fig.1一6SDS~PAGEanalysisofthereeombinantProteinl、M出火erZ、PET23一LDHwitholltinduction3、PET23一LDHafterinduetion4、PGEX一LDHwithoutinduction5.pGEX一LDHafterinduction6.pET23一LDHlysisPreeiPitateaftersonieation7.pET23一LDHlysissuPematentaftersonieation

硝酸纤维素膜困c膜)上，以免疫小鼠血清为抗体进行westem七lot分析，结果显示在33KDa蛋白处出现一特异性反应区带，而pET一23a转化菌则无明显的带出现(图1一8)，表明pET23一LDH有良好的抗原性。多抗鉴定采用West~blot，结果显示该免疫小鼠血清能识别恶性疟原虫和间日疟原虫分子量约为33KDa处的虫源蛋白，与恶性疟原虫抗原一23-

【参考文献】：
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本文编号：3480920