单纯疱疹病毒Ⅰ型新开放读码框UL57的鉴定

发布时间：2022-01-11 02:48

　　单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus type 1,HSV-1）潜伏感染期间LATs的活跃转录可能与其启动子与增强子两侧的CTCF结合序列有关。本研究对位于UL56下游与LAT启动子上游之间并与CTCF结合序列重叠存在的一个新开放读码框（本研究中命名为UL57）进行了鉴定。首先利用HSV-1（F）细菌人工染色体（HSV-BAC）系统构建重组病毒HSV-EGFP-UL57,将EGFP序列插入UL57 5’端;然后分别通过Northern Blot和Western Blot检测EGFP标记的UL57的转录和表达;同时构建敲除UL57的重组病毒HSV-ΔUL57,观察UL57对病毒增殖的影响。结果显示,重组病毒HSV-EGFP-UL57感染HEp-2细胞17h后,EGFP探针检测到两条转录产物,其中1.8kb转录产物与预测大小相符;使用放线菌酮（Cycloheximide,CHX）阻断病毒即刻早期蛋白/早期蛋白合成后,UL57转录受到明显抑制。重组病毒HSV-EGFP-UL57感染Vero细胞后,9h可见融合蛋白表达,24h表达明显;融合蛋白分子量与预测大小（58kD）... 

【文章来源】：病毒学报. 2019,35(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

重组病毒HSVEGFPUL57及HSVΔUL57结构示意图Figure1StructurediagramofthemutantHSV‐EGFP‐UL57andHSV‐ΔUL57

NorthernBlot检测UL57的转录Figure2DetectionofUL57transcriptionbyNorthernBlot

伺卸希?臼笛榧觳獾降牧教踝?疾??中，较大且转录水平较高的条带（即1.8kb条带）为目的基因转录产物的可能性较大。而另外一条较小且转录水平较低的条带（即1.4kb条带）可能为前者降解产物。3UL57的转录依赖病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的调节在重组病毒HSV‐EGFP‐UL57感染开始时加入蛋白合成抑制剂放线菌酮（CHX）以抑制病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的合成，感染17h后再检测UL57转录水平，结果发现当病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的合成被抑制后，UL57的转录水平亦明显降低（图3），说明UL57的转录依赖于病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的表达和调节。4WesternBlot检测UL57的表达以1MOI重组病毒HSV‐EGFP‐UL57感染Vero细胞，24h后分别利用抗c‐myc单抗和抗EGFP单抗检测UL57融合蛋白的表达。结果显示两种抗体均可检测到融合蛋白，但抗EGFP单抗效果更好；融合蛋白分子量与预测分子量（约58kD）大小基本一致（图4）。图1重组病毒HSVEGFPUL57及HSVΔUL57结构示意图Figure1StructurediagramofthemutantHSV‐EGFP‐UL57andHSV‐ΔUL57图2NorthernBlot检测UL57的转录Figure2DetectionofUL57transcriptionbyNorthernBlot图3病毒即刻早期蛋白/早期蛋白对UL57转录的调节Figure3RegulationofUL57transcriptionbyviralimmediate‐early/earlyproteins··54


本文编号：3581931