长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

发布时间：2022-01-11 14:03

　　该课题研究长期体外传代培养对人脐带间充质干细胞重要生物学属性的影响。采用组织块法分离人脐带间充质干细胞,体外反复传代培养后比较第5、10、20代细胞的主要生物学属性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测不同代次细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体常规核型分析和微阵列分析检测其基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测其多向分化潜能;定量RT-PCR检测端粒酶反转录基因hTERT的表达; SA-β-gal活性确定细胞老化状态。第5、10、20代脐带间充质干细胞呈现相同的增殖曲线,各代次干细胞的增殖速率无显著性差异。不同培养代次的脐带间充质干细胞表面均呈现CD105、CD90、CD44、CD73高表达, CD19、CD34、CD45及HLA-DR不表达或低表达。基因稳定性分析证实三个代次干细胞均为正常二倍体核型,染色体基因组未发生基因拷贝数缺失、重复和大片段纯合子现象。成脂和成骨分化潜能以及hTERT表达均未见显著性差异。SA-β-gal活性检测显示,随培养代次的增加,脐带间充质干细胞开始呈现衰老征象,尤以第20代明显。体外反复传代长期培养对人脐带间充质干细胞的基本生物学属性、基因稳定性及其多向分化潜能... 

【文章来源】：中国细胞生物学学报. 2019,41(01)CSCD

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

HLA-DRnegative.图2不同代次人脐带间充质干细?A~C分别代表P5、P10

张权等:长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响47基因、癌基因、98%OMIMMorbid基因和100%X染色体OMIMMorbid基因,包括了最全面、关联性最强的细胞遗传学分析。详细信息可参考http://media.affymetrix.com/support/technical/datasheets/cytoscan_hd_datasheet.pdf)。依照不同基因片段拷贝数增多与缺失的程度及其与疾并癌变基因的关联性确定其是否具有临床意义。染色体微阵列检测结果显示,第5、10、20代次传代培养的hUC-MSCs染色体全基因组扫描分析未检测到有临床意义的基因拷贝数缺失、重复和大片段纯合子现象(图5)。Culturetime(d)1234P5Cellnumber(×105)2.001.601.200.800.40P10P2056不同代次(第5、10、20代)的hUC-MSCs以同样密度接种于6孔培养板中,每天分别收集3孔不同代次的hUC-MSCs计数绘制生长曲线。图示代表3次重复实验。hUC-MSCsatdifferentpassageswereseededatsamedensityin6-wellplates.TheproliferativecurvesweremadebycountingthecellsharvestedfromthehUC-MSCsatdifferentpassageeveryday.Datawererepresentativeofthreeindependentexperiments.图3不同代次人脐带间充质干细胞的增殖活性检测Fig.3ProliferationcapacityofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsatdifferentpassagesA、B、C分别代表P5、P10、P20代hUC-MSCs核型图谱。所有代次(第5、10、20代)hUC-MSCs经常规核型分析呈正常双倍体(46,XY)核型。A,B,CrepresentedP5,P10,P20generationhUC-MSCs,respectively.AllhUC-MSCsanalyzedatdifferentpassagesshowedanormalkaryotype.图4不同代次人脐带间充质干细胞常规核型分析Fig.4ConventionalkaryotypingofhUC-MSCsatdifferentpassages(A)(B)(C)

【参考文献】：
期刊论文
[1]脐带间充质干细胞染色体核型制备及安全评估[J]. 张立新,陈亚宝,叶军,李林,林梅,黄俊星,吴正东.  海南医学. 2012(13)

博士论文
[1]脐带间充质干细胞临床前安全性研究[D]. 王有为.北京协和医学院 2013



本文编号：3582909