脂多糖通过p38/MAPK通路对巨噬细胞自噬的调控作用

发布时间：2022-01-11 21:06

　　【目的】观察脂多糖（LPS）对巨噬细胞自噬的影响及p38/MAPK通路在其中的作用。【方法】体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯LPS刺激组、LPS+P38抑制剂（SB203582）组和LPS+m TOR抑制剂（rapamycin）组。将前期构建的载体pc DNA3.1-GFP-LC3,转染RAW264.7,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况。q RT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3 m RNA表达水平的改变。利用Western blotting检测LC3-Ⅱ、p-P38、P38蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬过程中p38/MAPK通路的作用。【结果】在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;q RT-PCR检测到自噬相关基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ,和Bnip3 m RNA的表达在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;Western blotting检测发... 

【文章来源】：中山大学学报(医学科学版). 2014,35(06)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 实验分组
        1.2.2 各组巨噬细胞体外培养
        1.2.3 稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞系的建立
        1.2.4 用q RT-PCR方法检测与细胞自噬相关基因的m RNA表达水平
        1.2.5 在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成
        1.2.6 利用Western blotting检测LC3-Ⅱ、P38、p-P38的表达
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞系的建立
    2.2 检测各组巨噬细胞自噬情况
        2.2.1 q RT-PCR方法检测与细胞自噬相关的基因m RNA的表达
        2.2.2 GFP-LC3融合蛋白示踪自噬形成
        2.2.3 Western blotting检测LC3-Ⅱ、p-P38、P38
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]脂多糖通过PI3K/Akt/mTOR通路调控巨噬细胞自噬[J]. 杜涛,黄海,陈欣,丁红,张睿,刘梅兰,陈慧.  中国病理生理杂志. 2014(04)
[2]免疫治疗对母胎交界面NK细胞表面CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系（英文）[J]. 林羿,曾耀英,曾山,何贤辉,狄静芳,詹美意,关洁宾,肇静娴,全世明.  中国病理生理杂志. 2002(03)
[3]Immunomodulated signaling in macrophages: Studies on activation of Raf-1, MAPK, cPLA2 and secretion of IL-12[J]. 张宗梁,宋秋宝,林明群,丁跃梅,康小伟,姚錱.  Science in China（Series C:Life Sciences）. 1997(06)
[4]前列腺特异性膜抗原通过p38通路对前列腺癌细胞增殖、迁移的调控研究[J]. 杜涛,张一鸣,郭正辉,陈杰青,周诗丽,赖义明,曹亿,毕良宽,林天歆,黄海.  中华实验外科杂志. 2013 (12)



本文编号：3583462