NO-sGC-cGMP信号通路通过cGK调控PAI-2基因表达

发布时间：2022-02-09 05:54

　　目的:体外分析环磷酸鸟苷是否（cGMP）通过cGMP依赖性蛋白激酶（cGK）调控人纤溶酶原激活物抑制剂2（PAI-2）基因启动子活性,阐明PAI-2基因表达的分子调控机制。方法:构建cGK的真核过表达载体及其小干扰RNA（siRNA）敲减体系,以及PAI-2基因启动子缺失突变序列双萤光素酶报告载体,瞬时转染人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）,在可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）特异性刺激剂BAY 41-2272处理前后,real-time PCR检测PKG1（cGK编码基因）和PAI-2基因的mRNA水平。结果:cGK过表达能显著上调细胞内PKG1的mRNA水平和蛋白表达水平,cGK siRNA则能显著降低其表达（P<0.01）;BAY 41-2272处理HPASMCs后,PKG1基因和PAI-2基因的mRNA水平均明显升高,而cGK siRNA则能抑制该上调作用（P<0.01）;双萤光素酶报告基因实验显示,cGK过表达显著上调PAI-2基因启动子活性,而cGK敲减组其活性与对照组比较差异无统计学显著性;BAY 41-2272处理后PAI-2基因启动子缺失突变体PAI-2-Pr... 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2019,35(06)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材 料 和 方 法
    1 实验材料
    2 方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞转染和细胞处理
        2.3 PAI-2启动子的克隆
        2.4 细胞总RNA提取和RT-PCR
        2.5 Real-time PCR
        2.6 细胞总蛋白提取和Western blot实验
        2.7 双萤光素酶报告基因实验
    3 统计学分析
结 果
    1 cGK过表达和敲减体系验证
    2 cGMP对PAI-2基因表达的调控依赖于cGK
    3 cGMP通过cGK调控PAI-2基因启动子活性
    4 PAI-2转录起始位点上游-1 000～-800 bp为转录调控关键位点
讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展[J]. 耿德玉,原媛,郭华荣.  科技资讯. 2012(21)



本文编号：3616480