柯萨奇病毒A组6型衣壳蛋白VP1的原核表达及其抗血清的制备

发布时间：2022-02-09 16:36

　　目的原核表达柯萨奇病毒A组6型（Coxsackie virus group A 6 strain,CVA6）衣壳蛋白VP1,并制备其抗血清。方法合成经密码子优化的CVA6-VP1全长基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-VP1,转化感受态E. coli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达目的蛋白,同时优化IPTG终浓度（0. 1、0. 2、0. 3、0. 5 mmol/L）、诱导温度（15、20、25、30℃）及诱导时间（6、8、12、16 h）。表达产物采用Ni-NTA柱亲和层析纯化,将纯化重组蛋白免疫新西兰兔,制备VP1抗血清,微量细胞病变法检测血清抗体效价。结果重组质粒p ET-28a-VP1经双酶切及测序鉴定,构建正确。重组蛋白最适诱导条件为:IPTG终浓度为0. 3 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为12 h。重组蛋白相对分子质量约34 000,于上清和包涵体中均有表达,纯化后纯度可达95%以上。兔血清效价均> 1∶8,呈阳性。结论成功于原核表达系统中高效表达了可溶性CVA6-VP1蛋白,且获得效价较高的抗血清。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(02)CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 载体、菌株、毒株及细胞
    1.2主要试剂及仪器
    1.3 实验动物
    1.4 重组质粒的构建
    1.5 目的蛋白诱导表达条件的优化
        1.5.1 IPTG浓度的优化
        1.5.2 诱导温度的优化
        1.5.3 诱导时间的优化
    1.6 最适条件的诱导表达
    1.7 目的蛋白的纯化
    1.8 抗血清的制备
    1.9 中和抗体效价的检测
2 结果
    2.1 重组质粒的鉴定
    2.2 目的蛋白诱导表达条件的优化
        2.2.1 IPTG浓度的优化
        2.2.2 诱导温度的优化
        2.2.3 诱导时间的优化
    2.3 最适条件诱导表达产物的鉴定
    2.4 纯化产物的鉴定
    2.5 中和抗体效价
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]手足口病流行病学及防治的研究概况[J]. 刘颖丽,纪颖,于蕾,刘丹红,王越,解傲.  中国微生态学杂志. 2016(12)
[2]柯萨奇病毒A6致手足口病研究进展[J]. 张晓玲,胡芸文.  医学综述. 2016(20)
[3]柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达[J]. 王云龙,米海,李玉林,王继创,程蕾,邓黎黎,张春艳,孙园园.  动物医学进展. 2014(04)
[4]肠道病毒71 VP1基因的原核表达及其抗血清的制备[J]. 谢维欣,武建明,李杰,方永志,王洪梅,何洪彬.  免疫学杂志. 2013(01)
[5]北京市2010年手足口病死亡危险因素分析[J]. 李锡太,刘白薇,贾蕾,黎新宇,曲梅,李洁,李爽,吴晓娜,高志勇,黄芳,王全意.  中华疾病控制杂志. 2012(05)



本文编号：3617320