脑心通对大鼠大脑中动脉闭塞模型治疗机制的研究

发布时间：2017-05-13 08:21

  本文关键词：脑心通对大鼠大脑中动脉闭塞模型治疗机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:1.磁共振弥散加权成像(DWI)和灌注加权成像(PWI)联合应用,动态观察大鼠脑梗死区的组织灌注及脑梗死体积变化情况。侧面评价脑心通治疗脑梗死的疗效。2.采用longa Zea线栓法进行大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型的制备,给予脑心通治疗后,测定脑组织中TNF-α、MMP-9、NF-κB m RNA水平和TNF-α、MMP-9、NF-κB蛋白表达水平,探讨脑心通对脑梗死的治疗作用的机制。3.大鼠MCAO后,测定脑组织中AQP-4 m RNA水平和蛋白表达水平,测定缺血脑组织干湿重百分比,探讨脑心通对脑缺血大鼠模型脑水肿和AQP-4表达水平的影响。研究方法:1.实验动物分组与给药:所有动物实验过程均符合《实验室动物使用与爱护指南》规定。健康SD雄性大鼠,体重200~220g之间,在人工控制温度与昼夜节律的环境中饲养,大鼠自由饮水与饮食。所有大鼠随机分为(11)假手术组:只做颈部手术,不插入线栓;(12)模型对照组:结扎血管后予以生理盐水给药;(13)脑心通治疗组:结扎血管后给予脑心通于缺血后30min给药。每组大鼠分别按12h、1d、3d、5d、7d处死时间点分为5个亚组,每个亚组6只大鼠。给药途径:将脑心通胶囊内的药物粉末用蒸馏水溶解,稀释成0.05g/ml浓度备用。脑心通组大鼠于术后给予步长脑心通溶液(0.45g/kg·d)灌胃(依据前期实验基础);假手术组和模型对照组大鼠给予和脑心通组相等容积的生理盐水灌胃。2.动物模型制备:采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,大鼠清醒后采用Bederson5分评分法判断大鼠是否造模成功,评分≥2分即为造模成功。假手术组大鼠仅结扎颈部血管而不需插入线栓。3.MRI检查方法:分别于0.5d、1 d、3 d、5 d、7 d扫描磁共振,采用3.0T超导磁共振成像系统,大鼠专用线圈,大鼠经水合氯醛(0.35g/kg)麻醉后,采用俯卧位,行头颅冠状位扫描,层厚2 mm,层间距0 mm,层数11,观察脑梗死区域变化情况。4.脑组织中AQP-4、TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA的检测:取出脑组织后,用预冷的生理盐水冲洗后去除小脑和枕叶。取梗塞病灶周围脑组织约100mg,放入玻璃匀浆器中,加入Trizol,提取总RNA,在M-MLV逆转录酶作用下合成c DNA,再以c DNA为模板进行实时荧光定量PCR,检测其相对表达量。5.Western Blot法检测脑梗死灶周围脑组织中目的蛋白的表达水平:使用预冷的裂解液对各组大鼠脑组织进行裂解,按蛋白提取试剂盒说明书操作提取蛋白,测定蛋白浓度后,经SDS-PAG(10%分离胶、5%浓缩胶)凝胶电泳将蛋白分离开,再经过转膜电泳后蛋白转移到PVDF膜上。带有蛋白的PVDF膜用5%脱脂奶粉封闭,加入配制好的一抗在37℃孵育2~4h或者4℃过夜;用TBST溶液洗膜3次后,加入配制好的二抗在37℃孵育1h。TBST洗膜3次后用化学发光液滴满膜上,在凝胶成像系统经暗室曝光,并拍照保存。用图像分析系统对电泳条带进行分析,将各条带灰度值与β-actin条带灰度值的比值作为蛋白表达的相对值。6.统计学分析:采用SPSS 16.0系统软件包进行统计学分析,所有计量资料用均数±标准差(x±S)表示。两样本均数比较采用Student-t检验(双尾),多组剂量资料采用单因素方差分析(One-Way Analysis of Variance,One-Way ANOVO),P0.05为差异有统计学意义。研究结果:1.磁共振检查结果:随着治疗时间延长,模型组脑梗死体积变化不明显;脑心通治疗组脑梗死体积较模型对照组减小,差异有统计学意义(P0.05)。2.脑梗死大鼠脑组织的TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA的表达水平:与假手术组相比较,模型对照组TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组相比较,脑心通治疗组大鼠脑组织TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。3.脑梗死大鼠脑组织的TNF-α、MMP-9和NF-κB蛋白表达水平:与假手术组相比较,模型对照组TNF-α、MMP-9和NF-κB蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组相比较,脑心通治疗组大鼠脑组织TNF-α、MMP-9和NF-κB蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。4.脑梗死模型大鼠脑水肿情况:与假手术组相比较,模型对照组大鼠脑组织AQP-4表达量增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组相比较,脑心通治疗组大鼠脑组织AQP-4表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)。脑组织含水量测定,脑心通治疗组较模型对照组脑组织含水量减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.脑心通对大鼠脑梗死有具有治疗作用,脑梗死体积较模型对照组减少。2.脑心通可以降低MCAO大鼠脑组织的AQP4、TNF-α、MMP-9和NF-κBm RNA水平,以及降低脑梗死组织周围TNF-α、MMP-9和NF-κB的蛋白表达量,减轻缺血后脑组织的炎症反应,保护脑组织。3.脑心通可以改善大鼠缺血后的神经功能缺损程度,减轻脑水肿程度以防止进一步脑损伤。
【关键词】：脑心通 缺血性脑血管病 炎症 磁共振检查 脑水肿
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R277.7;R-332
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 缩略词表12-13
• 第一章 绪论13-17
• 1.1 研究背景13-14
• 1.2 研究目的14-15
• 1.3 研究方法15
• 1.4 实验思路15
• 1.5 预期结果15-16
• 1.6 研究意义16-17
• 第二章 大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型制作17-20
• 2.1 实验对象17
• 2.2 实验材料17
• 2.3 手术制作模型方法17-18
• 2.4 模型成功与否评价18
• 2.5 结果与造模体会18-20
• 第三章 脑心通治疗脑梗死的机制研究20-37
• 3.1 实验对象20
• 3.2 实验所用药物20
• 3.3 主要实验仪器与设备20-22
• 3.4 实验方法22-32
• 3.5 结果32-34
• 3.6 讨论34-37
• 第四章 脑心通对脑缺血大鼠脑组织AQP-4 和脑水肿的影响37-42
• 4.1 实验材料37
• 4.2 实验方法37-39
• 4.3 实验结果39-40
• 4.4 讨论40-42
• 参考文献42-47
• 第五章 综述47-62
• 参考文献55-62
• 攻读学位期间发表文章和参加课题情况62-63
• 致谢63

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑泽辉;;脑心通治疗皮质下动脉硬化性脑病临床分析[J];安徽医药;2011年07期

2 赵伟;;脑心通治疗冠心病稳定型心绞痛35例疗效观察[J];山西中医学院学报;2011年05期

3 罗西川;;脑心通对老年患者心脑血管病的干预治疗回顾性调查[J];世界中医药;2013年06期

4 陈立新,施生昌;脑心通治疗脑血管意外后遗症133例[J];福建中医药;1997年04期

5 孙利峰;;脑心通防治脑梗死的临床应用[J];中国实用医药;2007年04期

6 娄莉;王东琦;雷新军;崔长琮;;脑心通对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制[J];内蒙古中医药;2008年08期

7 王兰桂;;脑心通治疗亚高原地区急性缺血性脑血管病的临床观察[J];内蒙古中医药;2008年14期

8 胡昌亮;;脑心通治疗冠心病不稳定型心绞痛疗效观察[J];海南医学院学报;2009年10期

9 潘妍婷;脑心通治疗脑梗死病人的疗效观察[J];中西医结合心脑血管病杂志;2003年08期

10 姜风琴;宗立庚;许道营;张秀洲;;脑心通对2型糖尿病微血管病变患者血小板活化功能的影响[J];山东医药;2007年13期

中国重要会议论文全文数据库 前8条

1 张丽华;张晓卫;;脑心通治疗短暂性脑缺血发作临床观察[A];第五次全国中西医结合中青年学术研讨会论文汇编[C];2004年

2 贺志伟;李军英;;脑心通对急性心肌梗死患者再灌注后心肌和微血管的影响[A];第十一次全国中西医结合学会微循环学术会议会议指南及论文摘要[C];2011年

3 杨俊;李景春;宋永斌;是文辉;薛婧;许永华;余伍忠;徐江涛;;脑心通预处理可减轻急性低压低氧诱发的小鼠认知功能损害[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

4 司志国;;水蛭制剂“脑心通”防治中风的临床研究[A];全国急症学术大会论文专辑[C];1996年

5 杨俊;李景春;宋永斌;是文辉;薛婧;许永华;余伍忠;徐江涛;;脑心通预处理可减轻急性低压低氧诱发的小鼠认知功能损害[A];中国睡眠研究会第六届学术年会论文汇编[C];2010年

6 张红菊;赵忠新;夏斌;;大鼠脑缺血损伤的内质网机制及脑心通的保护作用[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

7 李国贤;鄢毅;;多病同治——血栓病的诊治进展[A];江西省第八次中西医结合活血化瘀学术研讨会暨心脑血管病培训班论文集[C];2009年

8 杨丽军;胡庆;闫瑞霞;;脑心通治疗脑出血疗效分析[A];第五次全国中西医结合中青年学术研讨会论文汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前5条

1 河北医科大学第二医院神经内科 张兰　张祥建;脑心通抗炎与抗动脉粥样硬化作用研究[N];医药经济报;2011年

2 莫一清;脑心通菊香枕 睡出好心脑[N];中国医药报;2004年

3 福建省人民医院 福建医科大学附属第一医院高血压研究所 姚沽　谢筱露 谢良地 王华军 许昌声;脑心通对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响[N];医药经济报;2010年

4 甘肃省康复中心医院老年病科 王彩燕　杨瑞芳 石秀娥 马晓峰;丹红注射液联合脑心通对早期肾病尿微量白蛋白的影响[N];医药经济报;2011年

5 童文臻;在发展中解决问题[N];中国计算机报;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 罗艳玲;脑心通对大鼠大脑中动脉闭塞模型治疗机制的研究[D];江苏大学;2016年

2 康宁;脑心通对急性缺血性脑组织神经保护机制的研究[D];河北医科大学;2014年

3 薛妍;脑心通对人脑微血管内皮细胞的影响[D];北京中医药大学;2013年

4 姚洁;脑心通对自发性高血压大鼠心脏和血管重塑的影响[D];福建医科大学;2007年

5 李军;复方脑心通滴丸的研究[D];中国海洋大学;2005年

6 赵静静;脑心通经由抑制树突状细胞成熟发挥抗动脉粥样硬化机制研究[D];复旦大学;2012年

7 杨宏武;脑心通对实验性脑缺血大鼠神经功能重建机理研究[D];南昌大学医学院;2013年

8 赵应敏;脑心通对缺血再灌注大鼠脑水肿的影响[D];郑州大学;2007年

9 曲立新;脑心通对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[D];山东大学;2010年

10 余广炜;脑心通对CYP2C19~*2基因突变气虚血瘀体质志愿者氯吡格雷抗血小板作用的调节[D];福建医科大学;2010年

  本文关键词：脑心通对大鼠大脑中动脉闭塞模型治疗机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：362055